條件性恐懼消除過程中海馬神經細胞再生的研究.pdf

1、前言
　　 焦慮障礙是精神科常見疾病之一,焦慮一恐懼情緒是其主要特征。研究表明成年中樞神經系統(tǒng)海馬區(qū)的神經再生在焦慮障礙的發(fā)生、發(fā)展及治療中起著重要作用。條件性恐懼的獲得、表達、消除過程均與海馬有關。本研究主要觀察條件性恐懼消除對大鼠海馬神經元再生的影響,從而探討焦慮障礙的發(fā)生機制及治療焦慮障礙的新途徑。
　　 材料與方法
　　 一、實驗材料
　　 1、實驗動物
　　 采用雄性SD成年大鼠32只,

2、體重220-270g,由中國醫(yī)科大學實驗動物中心提供。
　　 2、實驗試劑
　　 5-BrdU(sigma),大鼠抗5-BrdU單克隆抗體(abcam,ab6326),SABC試劑盒、DAB顯色劑均購自武漢博士德公司。
　　 3、實驗儀器
　　 ZH-DSX2大鼠穿梭箱(安徽淮北正華科技公司),光學顯微鏡(Nikon,Japan)、冰凍切片機(Leica,Germany)、低溫恒溫箱(Yamato,Chi

3、na)。
　　 二、實驗方法
　　 1、條件性恐懼模型制作
　　 在較安靜的環(huán)境下,將受試大鼠置于條件恐懼箱內適應1min,1min適應結束后,給大鼠十秒鐘(60dB)聲音刺激,并且在聲音刺激的最后兩秒給予(1mA)足底電刺激,最后一起結束,重復上述過程五次,時間間隔隨機。
　　 2、行為實驗
　　 大鼠進行連續(xù)三天、每天一次的足底電擊刺激以后(每天實驗時間:上午9:00-11:00),將其隨機分

4、為四組:BrdU2h實驗組(8只)、BrdU2h對照組(8只)和BrdU28d實驗組(8只)、BrdU28d對照組(8只)。連續(xù)六天每天將BrdU2h實驗組和BrdU28d實驗組大鼠暴露在電擊箱中三分鐘但是不再給予電刺激,使其形成恐懼性消除學習,同時每天觀察并記錄大鼠的僵住行為。消除后28d將BrdU28d實驗組和BrdU28d對照組再次暴露在電擊箱中,只給予聲音刺激,測量其僵住行為。
　　 3、神經再生的檢測
　　 在

5、最后一次消除結束兩小時后,全部大鼠腹腔注射溴脫氧尿苷(BrdU)(50mg/kg)。每兩小時注射一次,一共注射四次,最后一次注射后兩小時BrdU2h實驗組和BrdU2h對照組進行心臟灌流處死,BrdU28d實驗組和BrdU28d對照組28天后心臟灌流處死。應用免疫組織化學方法,檢測各組大鼠海馬齒狀回(DG)的神經細胞增殖和再生數(shù)量的表達變化。
　　 實驗結果
　　 1、在消除過程中大鼠的僵住時間逐漸下降,消除過程中第一天

6、與第四天、第五天、第六天之間僵住時間均存在顯著差異(P＜0.01)。
　　 2、免疫組織化學染色結果顯示BrdU2h實驗組增殖神經細胞的數(shù)量明顯高于BrdU2h對照組(P＜0.05);BrdU28d實驗組存活的神經元數(shù)量明顯高于BrdU28d對照組(P＜0.01)。
　　 結論
　　 1、消除過程中大鼠的僵住時間逐漸下降,表明消除抑制了大鼠焦慮恐懼情緒。
　　 2、條件性恐懼實驗組大鼠與對照組相比,大鼠海