S-烯丙基巰基半胱氨酸初步藥學(xué)評價及抗乳腺癌機制研究.pdf

1、過去幾十年來，惡性腫瘤已成為了人類健康的最大威脅，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢。據(jù)統(tǒng)計，目前已發(fā)現(xiàn)的癌癥超過200種，全球每年新發(fā)癌癥1000萬例以上，每年逾700萬人死于癌癥，致死人數(shù)約占所有死亡人數(shù)的13％。在所有的惡性腫瘤中，乳腺癌是全球女性最高發(fā)的癌癥，預(yù)測到2020年，發(fā)展中國家的乳腺癌患者會比目前高出26％。目前臨床上乳腺癌的治療方法主要是手術(shù)切除、化學(xué)治療、放射治療，但存在一定的局限性，特別是化學(xué)療法，毒副反應(yīng)嚴重，常伴有耐藥現(xiàn)

2、象。該嚴峻局面促使人們不斷尋找新型的抗腫瘤藥物，以期發(fā)現(xiàn)療效更好毒性更低的藥物。植物、動物和微生物一直是天然藥物的重要組成部分，也是人類防病治病的重要資源。因此以天然化合物作為基本骨架來進行結(jié)構(gòu)改造和化學(xué)修飾，已成為了新藥研發(fā)中的重要方法。
　　大蒜屬于百合科蔥屬類植物，既可作為風(fēng)味調(diào)料，也可廣泛用于保健藥物，其使用歷史已有上千年。大蒜中含有豐富的有機硫化物，其種類多達33種，是大蒜的主要活性成分。大量的研究數(shù)據(jù)表明這些有機硫化物

3、可以通過誘導(dǎo)細胞凋亡而發(fā)揮抗腫瘤作用。但是大蒜中的水溶性成分S-烯丙基巰基半胱氨酸(SAMC)目前未有商品化來源;其系統(tǒng)的理化性質(zhì)研究未見報道;抗乳腺癌的具體機制還有待進一步說明。因此，本論文合成并研究了SAMC的合成及純化工藝，期望適應(yīng)大規(guī)模生產(chǎn)，并對SAMC進行了初步的藥學(xué)評價，為制劑開發(fā)奠定基礎(chǔ);最后，選擇雌激素受體陽性細胞MCF-7和雌激素受體陰性細胞MDA-MB-231，研究SAMC誘導(dǎo)乳腺癌細胞調(diào)亡的方式和機制。
　　

4、以L-半胱氨酸鹽酸鹽、甲氧羰基磺酰氯和烯丙基硫醇為原料，經(jīng)過兩步反應(yīng)得到S-烯丙基巰基半胱氨酸;采用RP-18柱的柱分離方法純化得到了純度大于99％的SAMC。并進一步研究了SAMC的熔點、晶型、平衡溶解度、油水分配系數(shù)、穩(wěn)定性等物化性能，結(jié)果揭示SAMC物化性能穩(wěn)定，適用于臨床前和臨床制劑開發(fā)。使用SRB法研究了SAMC體外細胞毒性作用，結(jié)果表明SAMC對乳腺癌細胞MCF-7和MDA-MB-231的細胞毒性呈濃度和時間依賴性，當(dāng)SAM

5、C作用72h后，MCF-7細胞的IC50值為148μM，MDA-MB-231的IC50值為207μM;利用DAPI染色觀察了細胞凋亡形態(tài)以及Annexin Ⅴ/PI雙染法流式細胞儀測定了細胞凋亡率，實驗結(jié)果表明SAMC可誘導(dǎo)MCF-7和MDA-MB-231細胞凋亡，并伴隨著細胞色素C的釋放，PARP裂解片段的出現(xiàn)以及Bcl-2家族的改變，即促凋亡蛋白Bax的表達增加，而抗凋亡蛋白Bcl-2的表達下調(diào);針對乳腺癌細胞的周期阻滯作用研究結(jié)果

6、顯示SAMC可將MCF-7和MDA-MB-231阻滯在G0/G1期，此時周期相關(guān)蛋白cyclin D1、cyclin E1的表達增加，并激活了p53基因及其下游基因p21，導(dǎo)致乳腺癌細胞周期阻滯，而PCNA的下調(diào)表明SAMC可抑制乳腺癌細胞的增殖;JC-1染色法顯示SAMC可使乳腺癌細胞的線粒體膜電位降低;caspase酶活性測定結(jié)果表明SAMC可激活caspase-3/7、caspase-8和caspase-9;劃痕實驗探索SAMC對