ConABP對牛黃成核與核生長的影響.pdf

1、牛黃是一種珍貴的中藥材，為眾多著名中成藥的重要原料之一。由于天然牛黃產(chǎn)量極少，人工牛黃藥理作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)不如天然牛黃，因此市場上的牛黃一直處于供不應(yīng)求的狀態(tài)。國內(nèi)許多研究人員轉(zhuǎn)向人工培植牛黃的研究，但是主要集中在如何提高其產(chǎn)量而忽視了對牛黃形成機(jī)理的研究，這就導(dǎo)致人工培植牛黃的質(zhì)和量仍然不能滿足市場的需求。本課題組利用電泳技術(shù)、層析技術(shù)以及間接免疫熒光的方法研究了膽汁中蛋白質(zhì)在牛黃形成過程中的作用。為了進(jìn)一步研究牛黃形成的機(jī)理，本試驗利用親和

2、層析技術(shù)從牛膽汁中提取伴刀豆球蛋白結(jié)合蛋白(ConABP)，然后向成核性牛膽汁(新鮮膽汁過濾消毒后與菌液按體積60：1混合即為成核性牛膽汁)中添加觀察其體外促成核效應(yīng)；利用間接免疫熒光染色法研究細(xì)菌和ConABP在牛黃顆粒中的參與及其分布情況，以揭示ConABP在牛黃形成過程中的作用。 試驗一耐膽汁大腸桿菌的馴化及膽汁蛋白質(zhì)電泳分析本試驗首先用牛膽汁對O<,8>血清型大腸桿菌逐步馴化使其能夠在膽汁中生長繁殖，然后對牛新鮮膽汁以及

3、成核性膽汁成核前后的兩個階段進(jìn)行電泳分析。結(jié)果表明，新鮮牛膽汁中含有六條清晰的蛋白質(zhì)條帶及六條不清晰的條帶(分子量小于35KDa，大于6.6KDa)存在，成核性膽汁在成核前后六條清晰的蛋白質(zhì)條帶無明顯變化。 試驗二膽汁中ConABP的提取及其成核效應(yīng)檢測通過親和層析技術(shù)(ConA Sepharose 4B)從牛膽汁中提取C0nABP，并對其進(jìn)行電泳分析，然后向成核性膽汁中添加不同劑量的ConABP，以觀察其促成核效應(yīng)。結(jié)果表明，

4、牛膽汁中ConABP含有三種不同分子量的蛋白質(zhì)(29.2 KDa、26.4 KDa和16.0 KDa)；添加ConABP的各組明顯地縮短了成核性膽汁的體外成核時間(P<0.05)，添加3％和5％ConABP的兩組提高了成核高峰期的牛黃核的數(shù)量(P<0.05)以及成核初期和后期最大核的可視表面積(P<0.05)：添加組對成核性膽汁中總蛋白和鈣離子含量亦有一定的影響，說明ConABP對牛黃的形成和生長都有促進(jìn)作用。 試驗三牛黃中大腸