牛膽汁中CaBP對(duì)牛黃成核與核生長(zhǎng)的影響.pdf

1、為了解決天然牛黃藥源不足的問(wèn)題，上世紀(jì)70年代中期國(guó)內(nèi)一些單位開(kāi)始了牛體內(nèi)培植牛黃的研究并取得了成功。國(guó)內(nèi)的一些科研工作者開(kāi)展了模擬膽囊培植牛黃的技術(shù)研究，使培植牛黃的產(chǎn)量和質(zhì)量都有了較大的提高。即使如此，由于對(duì)培植牛黃形成機(jī)理了解較淺，使培植牛黃技術(shù)仍存在一些難以解決的問(wèn)題。 本研究動(dòng)態(tài)觀(guān)察了牛黃成核及核生長(zhǎng)的規(guī)律，檢測(cè)了膽汁中一些主要成分在牛黃形成過(guò)程中的變化。向膽汁中添加鈣結(jié)合蛋白(CaBP)，并檢測(cè)膽汁中相關(guān)指標(biāo)的變化，

2、以探討鈣結(jié)合蛋白對(duì)牛黃形成的影響。 利用牛膽汁馴化大腸桿菌(O<,8>)，得到耐膽汁大腸桿菌。馴化后的大腸桿菌其發(fā)酵尿素、氨基酸和葡磷棟水產(chǎn)生的生化特性發(fā)生變化。將耐膽汁大腸桿菌添加到膽汁中進(jìn)行牛黃培植，測(cè)得牛黃成核時(shí)間為3.7±0.2h，牛黃核的最高數(shù)量為5535±267個(gè)/m<'3>，且在不同的時(shí)間其數(shù)量的變化差異極顯著(P<0.01)；牛黃核可視面積達(dá)到高峰時(shí)為56.8±4.3μm<'2>；總蛋白、Ca<'2+>和總膽紅素

3、的濃度均出現(xiàn)先降低后升高而后再降低的變化，且總蛋白和Ca<'2+>的濃度隨時(shí)間的延長(zhǎng)變化顯著(P<0.05)，而總膽紅素濃度的變化差異不顯著(P>0.05)。 通過(guò)對(duì)膽汁中蛋白質(zhì)的電泳分析，得到了分子量為65KD、58 KD、51 KD、35.5KD、15.6 KD和6.6KD的六條較清晰的蛋白質(zhì)條帶和一些含量較低的不清晰的蛋白質(zhì)條帶。通過(guò)對(duì)CaBP進(jìn)行純化和電泳分析，證明CaBP分子量為6.6KD，含量為0.15mg/ml，且

4、具有與色素和脂質(zhì)結(jié)合的特性。在成核膽汁中添加大于10％CaBP，成核時(shí)間明顯縮短(P<0.05)，Ca<'2+>濃度和總蛋白的濃度變化差異顯著(P<0.05)，但總膽紅素的變化不顯著(P>0.05)。 用人工膽囊培植牛黃，利用家兔制備大腸桿菌和CaBP的抗體。用試管凝集法測(cè)得大腸桿菌抗血清的效價(jià)為1：5120，用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法測(cè)得CaBP的抗體的效價(jià)為1:51200。對(duì)牛黃中的大腸桿菌和CaBP進(jìn)行間接免疫熒光法染色。結(jié)果