不同方式抗原負(fù)載的樹(shù)突狀細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性T細(xì)胞體外腫瘤殺傷效應(yīng).pdf

1、免疫治療是繼手術(shù)治療、放療、化療之后腫瘤治療的新方法,其技術(shù)、方法日趨成熟,治療過(guò)程的安全性逐步提高.但是如何進(jìn)一步提高治療效率、降低復(fù)發(fā)率及各種并發(fā)癥,提高患者生存質(zhì)量已成為腫瘤免疫治療領(lǐng)域的一項(xiàng)重要研究?jī)?nèi)容.樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)是目前已知的功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞(APC),它具有強(qiáng)大的T細(xì)胞激活能力,并能活化初始型T細(xì)胞.它不僅能夠激活自體的抗腫瘤免疫,同樣能夠提高異體的抗腫瘤效應(yīng),基于此,DC的抗腫瘤免疫治療已在臨床上開(kāi)始應(yīng)用,顯示

2、出廣泛的前景.因?yàn)榇蟛糠植∪撕蛷?fù)發(fā)者的腫瘤組織和細(xì)胞的獲取較為困難,目前的方法難以廣泛有效地開(kāi)展DC的免疫治療.而RNA可以在體外進(jìn)行擴(kuò)增,再利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染DC能較好地解決該問(wèn)題,但是否會(huì)影響DC的誘導(dǎo)分化和功能,和其他方法相比,腫瘤殺傷效應(yīng)如何,需要進(jìn)一步探討.該文實(shí)驗(yàn)第一部分我們采用了外周血干細(xì)胞作為前體細(xì)胞,聯(lián)合應(yīng)用IL-4,GM-CSF和TNF-α誘導(dǎo)DC分化成熟,采取腫瘤細(xì)胞凍融抗原和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞總RNA兩種方式負(fù)載DC

3、,繼續(xù)培養(yǎng)至2周,光鏡和掃描電鏡觀察細(xì)胞形態(tài),流式細(xì)胞儀檢測(cè)DC表面標(biāo)志,以此來(lái)鑒定培養(yǎng)的DC.第二部分實(shí)驗(yàn)中,我們用尼龍毛柱法分離健康人外周血T細(xì)胞,與不同方式負(fù)載抗原的DC共培養(yǎng)后誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL),流式細(xì)胞儀檢測(cè)CTL的CD3、CD4和CD8的陽(yáng)性率,用乳酸脫氫酶(LDH)方法體外測(cè)定CTL殺傷腫瘤細(xì)胞的效率,比較凍融腫瘤抗原負(fù)載DC和轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞總RNA的DC所誘導(dǎo)出的CTL殺傷腫瘤的差異.通過(guò)該研究,