雙醋瑞因納米材料對骨性關節(jié)炎關節(jié)軟骨退變過程中iNOS表達的影響.pdf

1、目的:探討雙醋瑞因能否促進軟骨細胞的增值分化、降低軟骨細胞iNOS基因表達水平，減輕關節(jié)軟骨的退變過程，尋求骨關節(jié)治療的有效途徑。
　　方法:一，分組造模Wistar大鼠66只，隨機分為6組，為對照陰性組、對照陽性組、治療大劑量組、治療中劑量組、治療小劑量組、對照空白組，前5組給予切斷前交叉韌帶建立骨關節(jié)炎模型（簡稱ACLT模型），對照空白組給予雙側膝關節(jié)做關節(jié)囊切開。二，分組給藥:Wistar大鼠66只隨機分為6組:1，對照陰性

2、組12只，對照陰性組給于生理鹽水灌胃;2，對照陽性組12只，對照陽性組給于中藥灌胃;3，治療大劑量組12只，治療大劑量組給于雙醋瑞因藥物灌胃0.02mg/g（選擇2倍劑量）;4，治療中劑量組12只，治療中劑量組給予雙醋瑞因藥物灌胃0.02mg/g（選擇1倍劑量）;5，治療小劑量組12只，治療小劑量組給予雙醋瑞因藥物0.01mg/g（選擇1/2倍劑量）;6.對照空白組6只，對照空白組不予灌胃。三，取材及標本處理:取膝關節(jié)上下各2CM區(qū)域的

3、組織，去除皮膚，置于4％多聚甲醛液中，4℃下固定24小時，固定標本后剔除周圍軟組織及韌帶，PBS充分浸洗，流水沖洗2H，15％的EDTA液脫鈣2周，流水沖洗24小時，只留股骨部分，將其沿矢狀面分為2等份，修正組織塊并石蠟包埋后一部分行HE染色，另一部分行免疫組化檢測，兩部分組織均做矢狀面切片，間隔5um,（對照空白組的兩個膝關節(jié)都要取材，其余各組手術膝關節(jié)取材）四，檢測①肉眼觀察股骨髁關節(jié)面得病理大體改變②組織形態(tài)學（HE染色）:取股骨

4、內(nèi)測軟骨帶軟骨下骨質(zhì)軟骨標本做HE染色，觀察關節(jié)軟骨組織形態(tài)學變化。③取股骨內(nèi)測軟骨帶軟骨下骨質(zhì)軟骨標本做免疫組織化學:應用兔抗大鼠NOS多克隆抗體和羊抗兔IgG二抗后，DAB顯色，顯微鏡下觀察陽性細胞的數(shù)目。
　　結果:iNOS主要表達在軟骨細胞的細胞質(zhì)里面，治療組陽性細胞數(shù)目明顯低于對照組(p＜0.05)，治療組中的大劑量組的陽性細胞數(shù)目明顯低于中、小劑量和中藥組(p＜0.05)，應用雙醋瑞因納米材料的治療組與對照組比較，股骨