超順磁性氧化鐵納米顆粒與增強(qiáng)型綠色熒光蛋白標(biāo)記內(nèi)皮祖細(xì)胞的體外研究.pdf

1、天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文超順磁性氧化鐵納米顆粒與增強(qiáng)型綠色熒光蛋白標(biāo)記內(nèi)皮祖細(xì)胞的體外研究姓名：張文高申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)神經(jīng)外指導(dǎo)教師：楊學(xué)軍20090501天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文終向內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)展；多數(shù)細(xì)胞表達(dá)CD34抗原，部分未表達(dá)，說明外周血中的CDl33／CD34。亦可誘導(dǎo)形成EPC而表達(dá)VEGFR2抗原。2普魯士藍(lán)染色后，鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)鐵陽性呈藍(lán)色，SPIO未進(jìn)入細(xì)胞核，均處于胞質(zhì)內(nèi)，高濃度SPIO和脂質(zhì)體介導(dǎo)均有

2、利于EPCs攝取更多的鐵。將有、無脂質(zhì)體介導(dǎo)且含SPIO濃度不同的培養(yǎng)基培養(yǎng)后的細(xì)胞用PBS重懸，M對檢測T2WI像顯示隨細(xì)胞內(nèi)SPIO含量的增多，信號減低效果亦逐漸增強(qiáng)，5099／mLSPIO轉(zhuǎn)染試劑標(biāo)記的EPCs雖能使MRI信號明顯降低，但細(xì)胞狀態(tài)不良，易脫落，顯示出鐵毒性；25pg／mLSPIO脂質(zhì)體標(biāo)記的細(xì)胞生長形態(tài)好，臺盼藍(lán)染色顯示細(xì)胞活性不受抑制，M對信號改變亦能清晰顯示，以此濃度標(biāo)記細(xì)胞可以達(dá)到體內(nèi)示蹤要求。透射電鏡觀察S

3、PIO納米顆粒，未經(jīng)充分漩渦振蕩或超聲分散前，膠體液中SPIO易聚集，顆?？蛇_(dá)100nm；充分振蕩分散并經(jīng)銅網(wǎng)制樣后觀察，顆粒大小較均勻，平均60nm。電鏡下觀察吞噬SPIO的EPCs平均直徑15069m，胞質(zhì)中可見含有聚集程度不等鐵顆粒的吞噬體。3電泳圖結(jié)果示pPGKEGFP經(jīng)EcoRI和PstI單酶切為線性化質(zhì)粒后長度約為473kb；XbaI與BamHI雙酶切獲得EGFP片段在750bp，與預(yù)期片段長度相符。以六孔板位單位，通過優(yōu)化

4、脂質(zhì)體和質(zhì)粒DNA比例，最后確定脂質(zhì)體12txL、pPGK—EGFP質(zhì)粒8ng(4／3)時(shí)轉(zhuǎn)染效率最高，達(dá)到近30％；臺盼藍(lán)染色細(xì)胞成活率96％。結(jié)論：1免疫磁珠分選CDl33單個(gè)核細(xì)胞體外誘導(dǎo)培養(yǎng)，簡便高效，是獲取外周血中含量稀少的內(nèi)皮祖細(xì)胞的可靠方法。2SPIO標(biāo)記結(jié)合M砌細(xì)胞成像，檢測靈敏度高，效果可靠，是EPCs示蹤的有效方法。3EGFP標(biāo)iEPCs，熒光蛋白表達(dá)穩(wěn)定、特異性強(qiáng)，可以實(shí)現(xiàn)對EPCs的監(jiān)測示蹤，為以EPCs為自殺基