增強型綠色熒光蛋白標記骨髓間充質干細胞移植治療帕金森病大鼠.pdf

1、華中科技大學博士學位論文增強型綠色熒光蛋白標記骨髓間充質干細胞移植治療帕金森病大鼠姓名：胡琦申請學位級別：博士專業(yè)：神經(jīng)病學指導教師：朱遂強20090501華中科技大學博士學位論文華中科技大學博士學位論文3第一部分大鼠骨髓間充質干細胞體外培養(yǎng)、鑒定第一部分大鼠骨髓間充質干細胞體外培養(yǎng)、鑒定及向多巴胺能神經(jīng)元的分化及向多巴胺能神經(jīng)元的分化目的：目的：研究大鼠MSCs體外培養(yǎng)和增殖能力及紋狀體提取液誘導其分化為多巴胺能神經(jīng)元(dopamin

2、ergicneuron，DN)的潛能。方法：方法：取46周雄性SD大鼠完整的股骨、脛骨，用預冷的MSCs培養(yǎng)基反復沖洗骨髓腔，待雙側股骨、脛骨骨髓腔全部沖洗干凈后，用1ml注射器反復抽吸骨髓懸浮液，以打散細胞團制成單細胞懸液，再接種于六孔板培養(yǎng)。待細胞長至80－90％融合時即可進行傳代。采用流式細胞儀對其進行鑒定，后再分為A、B、C3組，前5天每組均用預誘導液誘導，后10天A組換用1：1體積比稀釋的紋狀體提取液，B組換用1：2體積比稀釋

3、的紋狀體提取液，C組則繼續(xù)用預誘導液誘導，在誘導后的第5和15天分別行巢蛋白(Nestin)、膠質細胞源性蛋白(GFAP)、神經(jīng)元特異性烯醇酶(NSE)和酪氨酸羥化酶(TH)免疫細胞化學鑒定，并對DN陽性細胞行計數(shù)，確定各組DN陽性率。結果：結果：MSCs貼壁生長，排列成束狀，漩渦狀或放射狀，梭形細胞胞漿較豐富，核大，呈卵圓形，核仁明顯，可以維持體外長期培養(yǎng)增殖，傳至15代，細胞形態(tài)和生長速度均無變化。流式細胞儀檢測第6代骨髓間充質干細

4、胞，其CD44、CD45、CD90、CD105陽性表達率分別為98.37％、0.56％、95.55％、84.45％。經(jīng)過誘導后細胞呈多極或雙極，并表達Nestin、GFAP、NSE及TH。A、B、C3組在第15天誘導出的DN陽性率分別是(11.90.5)％、(8.30.3)％及(1.60.2)％，經(jīng)x2檢驗A組和C組有統(tǒng)計學差異。結論：結論：MSCs可以在體外成功分離培養(yǎng)、擴增、純化，具有向神經(jīng)細胞分化的潛能，使用紋狀體提取液能誘導其向