馬鈴薯黑痣病生防芽胞桿菌篩選及作用機理初探.pdf

1、馬鈴薯黑痣病是生產(chǎn)上一種重要的土傳真菌病害，當前主要依靠溝施嘧菌酯等化學藥劑進行防控。而化學藥劑在殺死病原菌同時也會抑制或殺死土壤中的有益微生物，從而影響馬鈴薯產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。芽胞桿菌是一類行之有效的植物病害生防菌，本研究通過對馬鈴薯黑痣病生防芽胞桿菌的篩選、發(fā)酵條件的優(yōu)化、盆栽防效和促生作用及作用機理的初步研究，為馬鈴薯黑痣病的生物防治及優(yōu)良生防菌劑的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:
　　1.通過土壤稀釋法，共分離到142株芽

2、胞桿菌。經(jīng)抑菌圈法和平板對峙法共得到6株對馬鈴薯黑痣病菌具有較強抑制效果的芽胞桿菌，其抑菌圈直徑達28.5mm以上且抑菌帶寬度大于6.0mm。研究了溫度對所篩選到的菌株抑菌效果的影響，結(jié)果表明抑菌效果隨溫度下降而減小，溫度為15℃時，菌株HN-Q-8抑菌效果顯著高于其他菌株，溫度為10℃時，所得菌株均無抑菌作用，表明生防菌的有效抑菌溫度大于10℃。通過形態(tài)學觀察以及gyrB序列系統(tǒng)發(fā)育分析將篩選得到的6個芽胞桿菌鑒定為貝萊斯芽胞桿菌(B

3、acillus velezensis)。
　　2.采用平板計數(shù)法和比濁法對貝萊斯芽胞桿菌HN-Q-8的培養(yǎng)條件進行測定，結(jié)果表明，種子液的最佳培養(yǎng)時間為20h;菌株HN-Q-8的最佳培養(yǎng)基為葡萄糖3.0％，酵母膏0.5％，NaCl0.3％，MgSO40.1％;最佳培養(yǎng)條件為:溫度32℃，初始pH6.0，轉(zhuǎn)速200rpm，接種量2％，搖瓶最佳裝液量為40mL/250mL。
　　3.盆栽試驗測定了菌株HN-Q-8對馬鈴薯黑痣病的

4、防治效果和對馬鈴薯苗促生作用，結(jié)果表明HN-Q-8發(fā)酵液浸種和灌根處理均能夠有效防治馬鈴薯黑痣病，防效分別為52.72％和61.22％;能促進馬鈴薯植株的生長，尤其是馬鈴薯根系，鮮重增長率高達77.45％，根長增長率為23.27％，說明HN-Q-8能促使馬鈴薯根系生長。
　　4.研究了HN-Q-8對馬鈴薯相關(guān)防御酶活性的影響，將HN-Q-8發(fā)酵液施入馬鈴薯根際后顯著提高了馬鈴薯葉片內(nèi)SOD、POD和CAT活性，說明HN-Q-8能誘

5、導馬鈴薯產(chǎn)生防衛(wèi)反應(yīng)。HN-Q-8預處理后挑戰(zhàn)接種病原菌明顯提高了POD活性，說明HN-Q-8能在一定程度上誘導馬鈴薯產(chǎn)生抗病性。
　　5.采用綠色熒光蛋白(GFP)基因和氯霉素(Cm)抗性基因?qū)ω惾R斯芽胞桿菌HN-Q-8進行標記，研究其在馬鈴薯根際的定殖規(guī)律。結(jié)果表明GFP基因和Cm基因均能在HN-Q-8中很好的表達，室內(nèi)抑菌帶寬度為7.4mm;生長曲線與野生菌株大體一致，說明質(zhì)粒對HN-Q-8的生長無明顯不利的影響;質(zhì)粒穩(wěn)定試