前列腺癌融合基因TMPRSS2-ERG在順鉑誘導的細胞死亡中的作用.pdf

1、前列腺癌(prostatecancer,PCa)為男性最常見的惡性腫瘤之一，前列腺癌中可見TMPRSS2與ETS家族多個成員之間發(fā)生基因融合，而TMPRSS2-ERG為最常出現(xiàn)的基因融合類型。已有研究表明，TMPRSS2-ERG基因融合在PCa中與腫瘤細胞的侵襲與增殖相關，但對細胞死亡的作用鮮有研究。
　　目的:
　　分析TMPRSS2-ERG融合基因對順鉑(cisplatin)引起的細胞死亡的影響，并對其機制進行更深入的研

2、究，獲得TMPRSS2-ERG融合基因參與細胞死亡調控的證據(jù)。
　　方法:
　　1.用TMPRSS2-ERG陰性的DU145細胞構建TMPRSS2-ERG融合基因編碼序列
　　△ERG瞬時轉染株，cisplatin染毒，經(jīng)流式細胞儀檢測凋亡。
　　2.siRNA干擾TMPRSS2-ERG陽性的的VcaP細胞，介導TMPRSS2-ERG融合基因表達下調，cisplatin染毒，經(jīng)流式細胞儀檢測凋亡。
　　3.

3、TMPRSS2-ERG融合基因對cisplatin引起的細胞死亡的作用機制研究:
　　Western-blot檢測染毒處理細胞γH2AX蛋白的表達差異，明確融合基因對細胞DNA損傷的影響;q-PCR檢測293-ERG穩(wěn)定轉染株中凋亡相關基因的表達;染色質免疫共沉淀(ChIP)驗證q-PCR結果。
　　結果:
　　1.DU145細胞過表達TMPRSS2-ERG對順鉑誘導的細胞凋亡有抑制作用，轉染組與對照組細胞死亡率各為1

4、4.67±2.69％和30.59±3.28％。
　　2.siRNA干擾VcaP細胞使TMPRSS2-ERG表達下調后，順鉑處理，干擾組細胞凋亡率顯著升高，由原來的13.59±2.82％升至21.35±3.33％。
　　3.Western-blot結果顯示，293-ERG穩(wěn)定轉染株細胞染毒后DNA損傷指標γH2AX蛋白表達量比對照組相差約1.8倍，提示融合基因可抑制DNA損傷。
　　4.Q-PCR結果表明，過表達△ERG