大鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中細(xì)胞間粘附分子及P選擇素表達(dá)的研究.pdf

1、該研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法,觀察大鼠皮膚切創(chuàng)后不同時(shí)間細(xì)胞間粘附分子(ICAM-1)及P選擇素的表達(dá)變化,以期確定這兩種物質(zhì)表達(dá)與損傷時(shí)間變化的規(guī)律,為皮膚損傷時(shí)間判定提供有效的免疫組織化學(xué)指標(biāo).材料與方法:1.材料.取雄性健康SD大鼠39只,隨機(jī)分為13組,每組3只.于傷后5min-7d將大鼠斷頸處死,于傷口邊緣處取全層皮膚組織.取9只雄性健康SD大鼠,隨機(jī)分為3組做為死后傷對照組,取3只雄性健康SD大鼠,隨機(jī)分為3組做為死后傷對照組

2、,取3只雄性健康SD大鼠,取與致傷大鼠相同部位皮膚作為對照.石蠟包埋,進(jìn)行常規(guī)石蠟切片,厚度為5μm.2.方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)SABC法,步驟如下:1.石蠟切片常規(guī)脫蠟至水;2.3﹪的過氧化氫-甲醇孵育10分鐘,微波抗原修復(fù);3.3﹪正常山羊血清孵育,室溫下20分鐘.4.加入適當(dāng)稀釋的一抗(ICAM-1:1:200;P選擇素1:100),4℃過夜;5.滴加生物素標(biāo)記的山羊抗兔IgG,室溫下20分鐘;6.滴加試劑SABC,室溫孵育20分

3、鐘;7.DAB顯色5-10分鐘,水洗,蘇木素復(fù)染、透明、中性樹膠封片.以上抗體及SABC試劑盒均購自于武漢博士德生物工程有限公司.3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析.采用SPSS for windows 10.0軟件包,應(yīng)用方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理.結(jié)論:1.ICAM-1傷后在表皮角質(zhì)細(xì)胞、多核粒細(xì)胞、單核細(xì)胞及成纖維細(xì)胞中呈規(guī)律性表達(dá).2.ICAM-1和P選擇素可作為法醫(yī)病理學(xué)損傷時(shí)間判定的有效指標(biāo).3.P選擇素在判定死后傷與生前傷方面具有非常重要的意義.