小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過程中Ⅰ型大麻素受體(CB1R)表達(dá)的研究.pdf

1、目的：
　　 皮膚損傷愈合是一個復(fù)雜的過程，包括止血、炎癥、肉芽組織形成、上皮覆蓋和最終的組織重建。Ⅰ型大麻素受體（cannabinoid receptor type 1，CB1R）為內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)（endocannabinoid system，ECs）的一個主要的成員之一，它是G蛋白偶連受體（G protein-coupled receptor，GPCR），它主要表達(dá)于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，同時也部分表達(dá)于外周器官，如肝臟、胃腸等。

2、本研究用兩種識別CB1R不同區(qū)域的多克隆抗體檢測小鼠皮膚損傷愈合過程中CB1R的表達(dá)及變化情況，探討CB1R在皮膚損傷愈合中的作用及其在損傷時間推斷上應(yīng)用的可能性。
　　 實驗材料與方法：
　　 健康成年清潔級昆明系小鼠50只，雄性，體質(zhì)量35～40g，隨機分為10組。其中皮膚切創(chuàng)分為9個時間段組，另一組為正常對照組，每組均為5只小鼠。乙醚氣體吸入麻醉，背部剪毛處理后，常規(guī)手術(shù)消毒，在背部中央做一縱行長1.5cm皮膚全層

3、切口，深達(dá)筋膜。每只小鼠分籠飼養(yǎng)，給予消毒飼料及自來水以預(yù)防感染。分別于傷后0h，6h，12h，1d，3d，5d，7d，10d和14d將小鼠脫頸椎處死，取傷口處1.5cm×1.0cm皮膚組織。正常對照組小鼠麻醉后背部剪毛，不做切創(chuàng)，觀察至14d，脫頸椎處死，取相同部位同等大小皮膚，以備HE染色、免疫組織化學(xué)染色和Western blotting檢測應(yīng)用。應(yīng)用免疫組織化學(xué)和Western blot技術(shù)檢測50例小鼠皮膚切創(chuàng)后各時間段CB1

4、R變化情況，以非切創(chuàng)小鼠皮膚組織作對照，顯微鏡×400倍下，在損傷區(qū)及損傷周邊區(qū)隨機選取10個視野，計數(shù)細(xì)胞總數(shù)、陽性細(xì)胞數(shù)及陽性細(xì)胞率。應(yīng)用Fluochem V2.0軟件檢測各時間段的平均灰度值，測得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。用SPSS13.0 for Windows進(jìn)行單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié) 果：
　　 正常小鼠皮膚的表皮、毛囊、皮脂腺及皮肌層中表達(dá)CB1R。皮膚切創(chuàng)傷后

5、6h，多核粒細(xì)胞不表達(dá)CB1R。傷后12～24h，部分單個核細(xì)胞CB1R呈陽性。傷后1～3d，CB1R陽性細(xì)胞主要以單個核細(xì)胞和梭形成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞為主。傷后5～14d，CB1R表達(dá)主要在梭形成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞中。傷后0h～1d，CB1R陽性細(xì)胞率逐漸增加。傷后3～5d呈高表達(dá)狀態(tài)，5d達(dá)到高峰。傷后7d～14d，CB1R陽性細(xì)胞率逐漸下降。各組與相鄰上組的細(xì)胞總數(shù)及陽性細(xì)胞率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。Western blot結(jié)

6、果顯示正常皮膚內(nèi)有CB1R陽性條帶。皮膚切創(chuàng)后各時間段組CB1R表達(dá)強度有一定規(guī)律。傷后0h～3d，陽性條帶逐漸增強；傷后5d，CB1R達(dá)到高峰。傷后7d～14d，陽性條帶依然較強，但呈下降趨勢。除0h與正常對照組間平均灰度值差異無統(tǒng)計學(xué)意義外（P>0.05），其余各組間平均灰度值差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.正常小鼠皮膚的表皮、毛囊、皮脂腺及皮肌層中表達(dá)CB1R。
　　 2.小