大麻素2型受體參與電針上調(diào)炎性痛病灶皮膚組織β-內(nèi)啡肽的表達(dá).pdf

1、目的:已有研究表明內(nèi)源性阿片肽系統(tǒng)參與電針對(duì)炎性痛動(dòng)物模型的鎮(zhèn)痛效應(yīng),外周內(nèi)源性大麻素和大麻素2型受體(CB2受體)也參與了電針抑制炎性痛的作用。然而,外周CB2受體與內(nèi)源性阿片肽系統(tǒng)在炎癥部位是否具有相互作用,以及這種相互作用是否有助于電針對(duì)炎性痛的鎮(zhèn)痛作用,目前尚不清楚。本文重點(diǎn)研究CB2受體是否參與電針對(duì)炎性痛病灶皮膚組織中b-內(nèi)啡肽表達(dá)的調(diào)節(jié),從而激活外周m-阿片受體發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。
　　方法:大鼠左后肢足背皮下注射完全弗式

2、佐劑(complete freund's adjuvant,CFA)誘導(dǎo)炎性痛模型。采用輻射熱測(cè)痛法檢測(cè)足底熱痛閾值;用機(jī)械測(cè)痛法測(cè)量足底機(jī)械痛閾值;分別采用Real-time PCR和Western Blot來(lái)檢測(cè)阿黑皮素原(POMC) mRNA水平和b-內(nèi)啡肽表達(dá)水平;采用熒光雙標(biāo)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)b-內(nèi)啡肽在炎性痛病灶皮膚組織角化細(xì)胞和浸潤(rùn)的免疫細(xì)胞中的分布。
　　結(jié)果:
　　1.機(jī)械痛閾和熱痛閾行為學(xué)結(jié)果:與溶媒對(duì)

3、照組相比,足背皮下注射CFA后,大鼠足底熱痛閾值和機(jī)械痛閾值顯著下降(P<0.05);與炎癥加溶媒組相比,除了第5天外,造模后第2-6天選擇性CB2受體激動(dòng)劑AM1241能顯著升高炎性痛大鼠足底的熱痛閾值和機(jī)械痛閾值(P<0.05);AM1241給藥前24小時(shí)(第1、3、5天)同側(cè)足背皮下注射選擇性m-阿片受體拮抗劑b-funaltrexamine(簡(jiǎn)稱(chēng)b-FNA)能顯著翻轉(zhuǎn)AM1241的鎮(zhèn)痛效應(yīng)(P<0.05);與假電針組相比,CFA

4、誘導(dǎo)炎性痛后第2-6天,電針能顯著增加大鼠的熱痛閾值和機(jī)械痛閾值(P<0.05);此外電針治療前24小時(shí)(第1、3、5天)給予b-FNA能顯著抑制電針升高熱痛閾和機(jī)械痛閾的作用(P<0.05)。
　　2.Real-time PCR和Western Blot結(jié)果:與溶媒對(duì)照組相比,炎癥加溶媒組POMC mRNA水平和b-內(nèi)啡肽表達(dá)水平顯著升高(P<0.05);與炎癥加溶媒組相比, AM1241能顯著上調(diào)b-內(nèi)啡肽的表達(dá)水平(P<0.

5、05);與假電針組相比,電針能顯著上調(diào)POMC mRNA水平和b-內(nèi)啡肽表達(dá)水平(P<0.05);此外,選擇性CB2受體拮抗劑AM630預(yù)處理能顯著翻轉(zhuǎn)AM1241和電針上調(diào)POMC mRNA和b-內(nèi)啡肽的表達(dá)水平(P<0.05)。
　　3.熒光雙標(biāo)免疫組織化學(xué)技術(shù)結(jié)果:
　　A.與溶媒對(duì)照組相比,炎癥加溶媒組大鼠皮膚組織的表皮層明顯增厚,且角化細(xì)胞的數(shù)目明顯增多。角化細(xì)胞與b-內(nèi)啡肽雙標(biāo)細(xì)胞主要分布在炎癥皮膚組織的表皮層,

6、每組均有雙標(biāo)細(xì)胞。CFA致炎后大鼠炎癥皮膚組織中角化細(xì)胞和b-內(nèi)啡肽雙標(biāo)細(xì)胞占角蛋白單標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞(角化細(xì)胞)總數(shù)的百分比較溶媒對(duì)照組顯著增加(P<0.05)。此外,與炎癥加溶媒組相比,炎癥加AM1241組大鼠炎性痛病灶皮膚組織中標(biāo)記b-內(nèi)啡肽的角化細(xì)胞占角化細(xì)胞總數(shù)的百分比顯著增加(P<0.05)。與假電針組相比,電針治療能顯著上調(diào)大鼠炎癥皮膚組織中b-內(nèi)啡肽和角蛋白雙標(biāo)細(xì)胞的百分比(P<0.05)。同側(cè)足背皮下注射AM630后,其皮膚

7、組織中β-內(nèi)啡肽免疫反應(yīng)陽(yáng)性的角化細(xì)胞的百分比與炎癥加AM1241組或炎癥加電針組相比顯著降低(P<0.05)。
　　B.對(duì)比溶媒對(duì)照組,炎癥加溶媒組大鼠炎癥皮膚組織的表皮層及真皮層明顯增厚,且巨噬細(xì)胞的數(shù)目明顯增多。每組均有巨噬細(xì)胞與b-內(nèi)啡肽雙標(biāo)細(xì)胞,且雙標(biāo)細(xì)胞主要集中在炎癥皮膚組織的真皮層。CFA致炎后大鼠炎癥皮膚組織中巨噬細(xì)胞與b-內(nèi)啡肽雙標(biāo)細(xì)胞占ED1單標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞(巨噬細(xì)胞)總數(shù)的百分比較溶媒對(duì)照組顯著增加(P<0.05

8、)。與炎癥加溶媒組或炎癥加假電針組相比,炎癥加AM1241組和炎癥加電針組的皮膚組織中標(biāo)記b-內(nèi)啡肽的巨噬細(xì)胞占巨噬細(xì)胞總數(shù)的百分比顯著增加(P<0.05)。與炎癥加AM1241組或炎癥加電針組相比,同側(cè)足背皮下注射AM630后,其皮膚組織中b-內(nèi)啡肽免疫反應(yīng)陽(yáng)性的巨噬細(xì)胞的百分比顯著降低(P<0.05)。
　　C.與溶媒對(duì)照組相比,炎癥加溶媒組大鼠炎癥皮膚組織的表皮層及真皮層明顯增厚,且有大量的T-淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。每組均有T-淋巴

9、細(xì)胞與b-內(nèi)啡肽雙標(biāo)細(xì)胞,且雙標(biāo)細(xì)胞主要集中在炎癥皮膚組織的真皮層。CFA致炎后大鼠炎癥皮膚組織中T淋巴細(xì)胞和b-內(nèi)啡肽雙標(biāo)細(xì)胞占TCRab單標(biāo)陽(yáng)性細(xì)胞(T淋巴細(xì)胞)總數(shù)的百分比較溶媒對(duì)照組顯著增加(P<0.05)。與炎癥加溶媒組相比,炎癥加AM1241組炎性痛病灶局部標(biāo)記b-內(nèi)啡肽的T淋巴細(xì)胞占T淋巴細(xì)胞總數(shù)的百分比顯著增加(P<0.05)。與假電針組相比,電針治療能顯著上調(diào)大鼠炎性痛病灶皮膚組織中b-內(nèi)啡肽和TCRab雙標(biāo)細(xì)胞的百分