大麻素I型受體參與異氟醚預處理誘導的大鼠腦缺血耐受.pdf

1、缺血性腦卒中是由于各種原因所致的局部腦組織區(qū)域血液供應障礙,引起腦組織缺血缺氧性病變壞死,進一步導致引起神經功能缺失的腦血管性疾病。在發(fā)達國家中,缺血性腦卒中是僅次于缺血性心臟病的第二大死亡原因。我們國家現(xiàn)存腦卒中病人800多萬,其中主要是缺血性腦卒中,而每年仍以8.7％的速度上升;腦卒中每年給我國帶來的社會經濟負擔多達400億元。在過去二十年,雖然在缺血性腦卒中的診斷和治療上都取得了不少的進步,但是其死亡率仍然居高不下。這主要是由于缺

2、血性中風發(fā)病急,早期的溶栓治療時間窗有限,很多病人并不能得到及時有效的治療。因此缺血性腦卒中的損傷機制和防治研究一直是神經科學的熱點問題。
　　預處理概念的提出為神經保護作用的研究開辟了一條嶄新的道路。早在90年代,Kitagawa等研究發(fā)現(xiàn),缺血預處理可以誘導腦缺血耐受,產生腦保護作用。隨后人們又研究發(fā)現(xiàn),許多藥物(如LPS、TNF-α、IL-1)都可以模擬缺血預處理,產生神經保護作用。然而,由于這些方法本身的局限性,使它們不能

3、廣泛應用于臨床。異氟醚是一種臨床廣泛應用、安全性較好的吸入性麻醉劑。自從Newberg在實驗中首次發(fā)現(xiàn)異氟醚可以降低大腦耗氧量,產生腦保護作用以來,異氟醚預處理的中樞神經保護作用已經被大量研究證實,然而它的神經保護機制仍不清楚。
　　內源性大麻素是機體對抗興奮性毒性損傷第一道防線的重要組成部分。在動物腦損傷模型中發(fā)現(xiàn),給予內源性大麻素或大麻素受體激動劑可以產生神經保護作用,而選擇性大麻素I型受體(CB1)受體拮抗劑AM251可以逆

4、轉這種保護作用。并且CB1受體作為含量最豐富的神經調節(jié)受體之一,在腦組織中有著廣泛的表達。以往研究發(fā)現(xiàn)Ca2+內流可以啟動內源性大麻素的合成,而異氟醚預處理可以增加神經元內Ca2+的內流。這些提示我們,異氟醚預處理可能促進內源性大麻素的合成。
　　因此,我們推測:(1)異氟醚預處理可以上調腦組織CB1受體的表達;(2)CB1受體可能參與了異氟醚預處理誘導的腦缺血耐受。
　　目的:以大鼠大腦中動脈阻塞(MCAO)模型為基礎,探

5、討CB1受體在異氟醚預處理神經保護中的作用。
　　方法:(1)SpragueDawley(SD)大鼠隨機分為對照組和異氟醚預處理組,通過免疫熒光染色法和Westernblot方法檢測兩組動物腦組織中CB1的分泌和和表達變化情況;檢測MCAO2h再灌24h后兩組腦梗死容積和神經行為學評分。(2)48只雄性SD大鼠隨機分為6組:假手術組:僅暴露頸總動脈,不結扎血管;單純缺血組:阻塞大鼠大腦中動脈2h;異氟醚預處理組:大鼠吸入異氟醚(1

6、.5%)1h/d,連續(xù)5d;溶劑+異氟醚預處理組和CB1受體拮抗劑+異氟醚預處理組:每日在吸入異氟醚前30min分別給予溶劑3mL/kg(i.p.)和AM2511mg/kg(i.p.),連續(xù)5d;CB1受體拮抗劑+單純缺血組:每日腹腔注射(i.p.)AM2511mg/kg,連續(xù)5d。除假手術組外其余各組均在最后一次預處理24h后行頸內動脈線栓法致大腦中動脈阻塞(2h)模型,觀察再灌注后24h神經行為學評分,然后取大腦行2,3,5-氯化三

7、苯四唑(TTC)染色以計算腦梗死容積百分比。
　　結果:(1)Westernblot檢測結果顯示,與對照組相比,異氟醚預處理組大鼠海馬組織CB1受體表達量明顯升高(P<0.05);MCAO后異氟醚預處理組神經行為學評分明顯高于對照組,異氟醚預處理組腦梗死容積顯著小于對照組。(2)假手術組神經行為學正常且未見梗死灶;異氟醚預處理組和溶劑+異氟醚組預處理組腦梗死體積百分比明顯小于對照組、拮抗劑組和拮抗劑+異氟醚預處理組(P<0.05)

8、;神經行為學評分異氟醚預處理組和溶劑+異氟醚預處理組明顯高于對照組、拮抗劑組和拮抗劑+異氟醚預處理組(P<0.05);而拮抗劑組、拮抗劑+異氟醚預處理組與對照組之間神經行為學評分和腦梗死體積百分比均無統(tǒng)計學意義。
　　結論:通過對大鼠連續(xù)5d異氟醚的吸入,可以顯著提高腦組織中CB1受體的表達量;MCAO后,異氟醚預處理可以減少腦梗死容積,提高神經功能學評分,而這種保護作用被AM251所逆轉。CB1可能參與了異氟醚預處理誘導的腦缺血