大麻素受體參與電針預處理誘導不同時相的腦保護作用.pdf

1、探索安全有效、簡便易行的非缺血預處理措施，是腦保護領域研究的熱點之一。我們實驗室首先發(fā)現(xiàn)在大鼠短暫局灶性腦缺血模型中給予電針刺激“百會穴”預處理，可誘導產(chǎn)生快速相和延遲相腦缺血耐受效應，產(chǎn)生腦保護作用，且具有最佳組合參數(shù)和穴位特異性。隨后研究發(fā)現(xiàn)，阿片δ和μ受體參與電針預處理誘導的腦保護效應，應用δ和μ受體拮抗劑并不能完全阻斷電針預處理的腦保護作用，提示其保護作用可能還由其它活性物質參與或多條信號通路介導。研究表明，大麻素CB1受體的激

2、動劑具有腦保護作用，并且阿片肽受體和CB1受體具有協(xié)同和交互作用，提示大麻素CB1受體可能參與了電針預處理誘導的腦保護作用。同時有證據(jù)顯示針灸產(chǎn)生的神經(jīng)保護作用，可能還與抑制膠質細胞過度活化和抗炎反應有關。膠質細胞在腦缺血后活化，釋放出炎癥介質，誘導炎癥反應，造成神經(jīng)元的二次損傷。由于炎癥反應主要在缺血后晚期造成腦損傷，故抑制前30min分別給予溶劑3ml/kg(ip)和AM2511mg/kg(ip)；AM630＋EA組和AM630+A

3、M251＋EA組在電針預處理前3h分別給予溶劑3ml/kg(ip)和AM6301mg/kg(ip)。除Sham組外其余各組均在電針預處理后2h行MCAO，缺血120min再灌注后72h行神經(jīng)功能學評分和TTC染色，檢測腦梗死容積百分比的變化。
　　結果：
　　1.電針預處理后大鼠腦內大麻素CB1和CB2受體表達的變化
　　1.1.大麻素CB1受體mRNA表達的變化
　　與CON組和SP組相比，電針預處理后30mi

4、n和60min，CB1受體mRNA的表達顯著增高(P<0.01)；電針預處理后120min其含量降至CON組水平。
　　1.2.大麻素CB1受體蛋白表達的變化
　　Westernblot結果顯示，與CON組和SP組相比，電針預處理后30min和60min，CB1受體蛋白的表達沒有變化(P>0.05)；電針預處理后120min，CB1受體蛋白的表達顯著增高(P<0.01)。
　　1.3.大麻素CB2受體mRNA和蛋白表達

5、的變化
　　各組、各個時間點RT-PCR和Westernblot檢測CB2受體mRNA和蛋白表達，結果均沒有差異(P>0.05)。
　　2.大麻素CB1受體參與電針預處理誘導的快速相腦保護作用
　　2.1.神經(jīng)功能學評分
　　再灌注72h，EA組的神經(jīng)功能學評分明顯高于MCAO組(P<0.01,EAvsMCAO)。AM251可以逆轉電針預處理改善神經(jīng)功能學評分的作用(P<0.01,AM251+EAvsEA)，而A

6、M630沒有類似作用(P>0.05,AM630+EAvsEA)。MCAO組、AM251+EA組和AM630+AM251+EA組之間比較，神經(jīng)功能學評分無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　2.2.腦梗死容積百分比
　　再灌注72h，EA組的腦梗死容積百分比明顯低于MCAO組(P<0.01,EAvsMCAO)。AM251可以逆轉電針預處理降低腦梗死容積百分比的作用(P<0.01,AM251+EAvsEA)，而AM630沒有類似作

7、用(P>0.05,AM630+EAvsEA)。MCAO組、AM251+EA組和AM630+AM251+EA組之間比較，腦梗死容積百分比無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　第二部分：大麻素受體在電針預處理誘導的延遲相腦保護中的作用
　　方法：
　　1.觀察電針預處理后大鼠腦內大麻素受體表達的變化
　　成年雄性SD大鼠（280-320g）66只，按隨機數(shù)字表法分為3組：CON組、SP組和EA組。CON組：無任何處理；

8、SP組：戊巴比妥鈉（40mg/kg，i.p.）麻醉；EA組：腹腔注射戊巴比妥鈉40mg/kg麻醉后電針刺激“百會穴”，選用疏密波、頻率2/15Hz、電流強度1mA，持續(xù)刺激30min，處理1次。分別在電針預處理后的2h、6h、12h、18h和24h，取大鼠右側半腦紋狀體行RT-PCR和Westernblot檢測大麻素CB1和CB2受體含量。
　　2.研究大麻素受體在電針預處理誘導的延遲相腦保護中的作用
　　成年雄性SD大鼠（

9、280-320g）56只，按隨機數(shù)字表法分為7組(n=8)：Sham組、MCAO組、EA組、Vehicle＋EA組、AM630＋EA組、AM251＋EA組和AM630+AM251＋EA組。Sham組僅行假手術；MCAO組為大腦中動脈阻塞再灌注；EA組在MCAO前24h給予電針刺激“百會穴”30min；Vehicle＋EA組、AM251＋EA組和AM630+AM251＋EA組在電針預處理前30min分別給予溶劑3ml/kg(ip)和AM2

10、511mg/kg(ip)；AM630＋EA組和AM630+AM251＋EA組在電針預處理前3h給予AM6301mg/kg(ip)。除Sham組外其余各組均在電針預處理后24h行MCAO，缺血120min再灌注72h行神經(jīng)功能學評分和TTC染色，檢測腦梗死容積百分比的變化。
　　結果：
　　1.電針預處理后大鼠腦內大麻素CB1和CB2受體表達的變化
　　1.1.大麻素CB1受體mRNA和蛋白的表達
　　各組、各個時

11、間點RT-PCR檢測結果沒有差異(P>0.05)；與CON組和SP組相比，電針預處理后2h，CB1受體蛋白的表達量顯著增高(P<0.01)，在其它時間點其表達量沒有變化(P>0.05)。
　　1.2.大麻素CB2受體mRNA的表達
　　與CON組和SP組相比，電針預處理后18h，CB2受體mRNA的表達顯著增高(P<0.01)；電針預處理后24h其含量降至CON組水平。
　　1.3.大麻素CB2受體蛋白的表達
　

12、　Westernblot結果顯示，與CON組和SP組相比，電針預處理后24h，CB2受體蛋白的表達量顯著增高(P<0.01)，在其它時間點其表達量沒有變化(P>0.05)。
　　2.大麻素CB2受體參與電針預處理誘導的延遲相腦保護作用
　　2.1.神經(jīng)功能學評分
　　再灌注72h，EA組的神經(jīng)功能學評分明顯高于MCAO組(P<0.01)。AM630可以部分逆轉電針預處理改善神經(jīng)功能學評分的作用(P<0.01)，而AM2

13、51沒有類似作用(P>0.05)。AM630+EA組和AM630+AM251+EA組之間比較，神經(jīng)功能學評分無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　2.2.腦梗死容積百分比
　　再灌注72h，EA組的腦梗死容積百分比明顯低于MCAO組(P<0.01)。AM630可以部分逆轉電針預處理降低腦梗死容積百分比的作用(P<0.01)，而AM251沒有類似作用(P>0.05)。AM630+EA組和AM630+AM251+EA組之間比較，腦

14、梗死容積百分比無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　小結：
　　1．電針預處理可以快速上調大鼠腦內大麻素CB1受體的表達量，而在同樣時間點CB2受體表達沒有變化；并且CB1受體拮抗劑AM251可以逆轉電針預處理誘導的快速相腦保護作用，而CB2受體拮抗劑AM630沒有類似作用，提示CB1受體參與了電針預處理誘導的快速相腦保護作用。
　　2．電針預處理可以延遲上調大鼠腦內大麻素CB2受體的表達量，而在同樣時間點CB1受體表達