大麻素受體參與電針預(yù)處理誘導(dǎo)不同時(shí)相的腦保護(hù)作用.pdf

1、探索安全有效、簡(jiǎn)便易行的非缺血預(yù)處理措施，是腦保護(hù)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。我們實(shí)驗(yàn)室首先發(fā)現(xiàn)在大鼠短暫局灶性腦缺血模型中給予電針刺激“百會(huì)穴”預(yù)處理，可誘導(dǎo)產(chǎn)生快速相和延遲相腦缺血耐受效應(yīng)，產(chǎn)生腦保護(hù)作用，且具有最佳組合參數(shù)和穴位特異性。隨后研究發(fā)現(xiàn)，阿片δ和μ受體參與電針預(yù)處理誘導(dǎo)的腦保護(hù)效應(yīng)，應(yīng)用δ和μ受體拮抗劑并不能完全阻斷電針預(yù)處理的腦保護(hù)作用，提示其保護(hù)作用可能還由其它活性物質(zhì)參與或多條信號(hào)通路介導(dǎo)。研究表明，大麻素CB1受體的激

2、動(dòng)劑具有腦保護(hù)作用，并且阿片肽受體和CB1受體具有協(xié)同和交互作用，提示大麻素CB1受體可能參與了電針預(yù)處理誘導(dǎo)的腦保護(hù)作用。同時(shí)有證據(jù)顯示針灸產(chǎn)生的神經(jīng)保護(hù)作用，可能還與抑制膠質(zhì)細(xì)胞過(guò)度活化和抗炎反應(yīng)有關(guān)。膠質(zhì)細(xì)胞在腦缺血后活化，釋放出炎癥介質(zhì)，誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)，造成神經(jīng)元的二次損傷。由于炎癥反應(yīng)主要在缺血后晚期造成腦損傷，故抑制前30min分別給予溶劑3ml/kg(ip)和AM2511mg/kg(ip)；AM630＋EA組和AM630+A

3、M251＋EA組在電針預(yù)處理前3h分別給予溶劑3ml/kg(ip)和AM6301mg/kg(ip)。除Sham組外其余各組均在電針預(yù)處理后2h行MCAO，缺血120min再灌注后72h行神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分和TTC染色，檢測(cè)腦梗死容積百分比的變化。
　　結(jié)果：
　　1.電針預(yù)處理后大鼠腦內(nèi)大麻素CB1和CB2受體表達(dá)的變化
　　1.1.大麻素CB1受體mRNA表達(dá)的變化
　　與CON組和SP組相比，電針預(yù)處理后30mi

4、n和60min，CB1受體mRNA的表達(dá)顯著增高(P<0.01)；電針預(yù)處理后120min其含量降至CON組水平。
　　1.2.大麻素CB1受體蛋白表達(dá)的變化
　　Westernblot結(jié)果顯示，與CON組和SP組相比，電針預(yù)處理后30min和60min，CB1受體蛋白的表達(dá)沒(méi)有變化(P>0.05)；電針預(yù)處理后120min，CB1受體蛋白的表達(dá)顯著增高(P<0.01)。
　　1.3.大麻素CB2受體mRNA和蛋白表達(dá)

5、的變化
　　各組、各個(gè)時(shí)間點(diǎn)RT-PCR和Westernblot檢測(cè)CB2受體mRNA和蛋白表達(dá)，結(jié)果均沒(méi)有差異(P>0.05)。
　　2.大麻素CB1受體參與電針預(yù)處理誘導(dǎo)的快速相腦保護(hù)作用
　　2.1.神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分
　　再灌注72h，EA組的神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分明顯高于MCAO組(P<0.01,EAvsMCAO)。AM251可以逆轉(zhuǎn)電針預(yù)處理改善神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分的作用(P<0.01,AM251+EAvsEA)，而A

6、M630沒(méi)有類似作用(P>0.05,AM630+EAvsEA)。MCAO組、AM251+EA組和AM630+AM251+EA組之間比較，神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2.2.腦梗死容積百分比
　　再灌注72h，EA組的腦梗死容積百分比明顯低于MCAO組(P<0.01,EAvsMCAO)。AM251可以逆轉(zhuǎn)電針預(yù)處理降低腦梗死容積百分比的作用(P<0.01,AM251+EAvsEA)，而AM630沒(méi)有類似作

7、用(P>0.05,AM630+EAvsEA)。MCAO組、AM251+EA組和AM630+AM251+EA組之間比較，腦梗死容積百分比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　第二部分：大麻素受體在電針預(yù)處理誘導(dǎo)的延遲相腦保護(hù)中的作用
　　方法：
　　1.觀察電針預(yù)處理后大鼠腦內(nèi)大麻素受體表達(dá)的變化
　　成年雄性SD大鼠（280-320g）66只，按隨機(jī)數(shù)字表法分為3組：CON組、SP組和EA組。CON組：無(wú)任何處理；

8、SP組：戊巴比妥鈉（40mg/kg，i.p.）麻醉；EA組：腹腔注射戊巴比妥鈉40mg/kg麻醉后電針刺激“百會(huì)穴”，選用疏密波、頻率2/15Hz、電流強(qiáng)度1mA，持續(xù)刺激30min，處理1次。分別在電針預(yù)處理后的2h、6h、12h、18h和24h，取大鼠右側(cè)半腦紋狀體行RT-PCR和Westernblot檢測(cè)大麻素CB1和CB2受體含量。
　　2.研究大麻素受體在電針預(yù)處理誘導(dǎo)的延遲相腦保護(hù)中的作用
　　成年雄性SD大鼠（

9、280-320g）56只，按隨機(jī)數(shù)字表法分為7組(n=8)：Sham組、MCAO組、EA組、Vehicle＋EA組、AM630＋EA組、AM251＋EA組和AM630+AM251＋EA組。Sham組僅行假手術(shù)；MCAO組為大腦中動(dòng)脈阻塞再灌注；EA組在MCAO前24h給予電針刺激“百會(huì)穴”30min；Vehicle＋EA組、AM251＋EA組和AM630+AM251＋EA組在電針預(yù)處理前30min分別給予溶劑3ml/kg(ip)和AM2

10、511mg/kg(ip)；AM630＋EA組和AM630+AM251＋EA組在電針預(yù)處理前3h給予AM6301mg/kg(ip)。除Sham組外其余各組均在電針預(yù)處理后24h行MCAO，缺血120min再灌注72h行神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分和TTC染色，檢測(cè)腦梗死容積百分比的變化。
　　結(jié)果：
　　1.電針預(yù)處理后大鼠腦內(nèi)大麻素CB1和CB2受體表達(dá)的變化
　　1.1.大麻素CB1受體mRNA和蛋白的表達(dá)
　　各組、各個(gè)時(shí)

11、間點(diǎn)RT-PCR檢測(cè)結(jié)果沒(méi)有差異(P>0.05)；與CON組和SP組相比，電針預(yù)處理后2h，CB1受體蛋白的表達(dá)量顯著增高(P<0.01)，在其它時(shí)間點(diǎn)其表達(dá)量沒(méi)有變化(P>0.05)。
　　1.2.大麻素CB2受體mRNA的表達(dá)
　　與CON組和SP組相比，電針預(yù)處理后18h，CB2受體mRNA的表達(dá)顯著增高(P<0.01)；電針預(yù)處理后24h其含量降至CON組水平。
　　1.3.大麻素CB2受體蛋白的表達(dá)
　

12、　Westernblot結(jié)果顯示，與CON組和SP組相比，電針預(yù)處理后24h，CB2受體蛋白的表達(dá)量顯著增高(P<0.01)，在其它時(shí)間點(diǎn)其表達(dá)量沒(méi)有變化(P>0.05)。
　　2.大麻素CB2受體參與電針預(yù)處理誘導(dǎo)的延遲相腦保護(hù)作用
　　2.1.神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分
　　再灌注72h，EA組的神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分明顯高于MCAO組(P<0.01)。AM630可以部分逆轉(zhuǎn)電針預(yù)處理改善神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分的作用(P<0.01)，而AM2

13、51沒(méi)有類似作用(P>0.05)。AM630+EA組和AM630+AM251+EA組之間比較，神經(jīng)功能學(xué)評(píng)分無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2.2.腦梗死容積百分比
　　再灌注72h，EA組的腦梗死容積百分比明顯低于MCAO組(P<0.01)。AM630可以部分逆轉(zhuǎn)電針預(yù)處理降低腦梗死容積百分比的作用(P<0.01)，而AM251沒(méi)有類似作用(P>0.05)。AM630+EA組和AM630+AM251+EA組之間比較，腦

14、梗死容積百分比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　小結(jié)：
　　1．電針預(yù)處理可以快速上調(diào)大鼠腦內(nèi)大麻素CB1受體的表達(dá)量，而在同樣時(shí)間點(diǎn)CB2受體表達(dá)沒(méi)有變化；并且CB1受體拮抗劑AM251可以逆轉(zhuǎn)電針預(yù)處理誘導(dǎo)的快速相腦保護(hù)作用，而CB2受體拮抗劑AM630沒(méi)有類似作用，提示CB1受體參與了電針預(yù)處理誘導(dǎo)的快速相腦保護(hù)作用。
　　2．電針預(yù)處理可以延遲上調(diào)大鼠腦內(nèi)大麻素CB2受體的表達(dá)量，而在同樣時(shí)間點(diǎn)CB1受體表達(dá)