重組人胸腺素a原對正常小鼠、糖尿病小鼠皮膚傷口愈合過程中MMP-9-TIMP-1-Nrf2表達(dá)的影響及機(jī)制探討.pdf

1、國內(nèi)外研究表明,胸腺素a原(ProTa)具有調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)、抗氧化、抗感染、抗炎癥、抗凋亡、促進(jìn)細(xì)胞分裂、增殖的功能,這為我們開展ProTa在正常、糖尿病(diabetes mellitus,DM)鼠皮膚受創(chuàng)后的作用及機(jī)理的研究提供了理論依據(jù)。
　　 基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)是一種Ⅳ型膠原酶,在急性傷口的早期愈合過程中高表達(dá)隨后下降至正常水平,在整個(gè)傷口愈合中發(fā)揮著巨大的作用。組織金屬蛋白酶抑制劑-1(TIMP-1)是MM

2、P一9的特異性抑制劑,在許多細(xì)胞因子的分泌和增殖中作用很大。
　　 Nrf2是調(diào)控細(xì)胞對抗外來異物和氧化損傷的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子,可以保護(hù)機(jī)體免受由高糖高脂引起的氧化損傷。Nrf2的缺失或激活障礙會(huì)引起細(xì)胞對應(yīng)激源的敏感性增高,與化學(xué)促癌的發(fā)生、炎癥修復(fù)進(jìn)程延長、細(xì)胞調(diào)亡等病變過程密切相關(guān)。
　　 ProTa具有免疫調(diào)節(jié)和促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用,在傷口形成后,各種因子在皮膚愈合過程中是否受ProTa調(diào)節(jié)及其可能機(jī)制是什么,以往的研

3、究并沒有涉及到,本研究旨在利用體視學(xué)、組織學(xué)、RT-PCR和ELISA技術(shù)闡明ProTa對皮膚傷口愈合過程中MMP-9/TIMP-1、Nrf2基因和蛋白表達(dá)的影響,為研究ProTa在促進(jìn)傷口愈合中的臨床應(yīng)用提供了理論依據(jù),以期為正常、糖尿病創(chuàng)傷的預(yù)防和治療開辟新的途徑。本論文分為四個(gè)部分。
　　 第一部分為ProTa促進(jìn)正常小鼠皮膚愈合的實(shí)驗(yàn)。該部分通過體視學(xué)和組織學(xué)方法評估60、120μg/ml的ProTa處理組與PBS對照組

4、傷口愈合效果的情況,取愈合效果最好的120μg/ml ProTa處理組設(shè)計(jì)逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reversetranscription polymerase chain reaction,RT-PCR)、酶聯(lián)免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,EIASA)實(shí)驗(yàn),以從mRNA水平、蛋白水平檢測術(shù)后不同時(shí)點(diǎn)MMP-9/TIMP-1、Nrf2、ProTa在傷口組織中的表達(dá)情況。結(jié)果表明,120μg/m

5、l ProTa的愈合效果最好:ProTa(120μg/ml)自身可通過促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖來促進(jìn)皮膚傷口愈合,同時(shí)ProTa也可能通過抑制MMP-9、上調(diào)TIMP-1、Nrf2、ProTa的表達(dá)量來加速傷口愈合。
　　 第二部分為ProTa促進(jìn)DM(由STZ誘導(dǎo))小鼠的皮膚愈合實(shí)驗(yàn):正常小鼠注射STZ制作DM模型成功后再制作皮膚傷口模型。本部分采用體視學(xué)、組織學(xué)、Masson三色染色法、RT-PCR等方法研究ProTa對糖尿病

6、小鼠傷口愈合過程中MMP-9/TIMP-1、Nrf2、ProTa的影響。結(jié)果表明,ProTa同樣可以促進(jìn)糖尿病傷口的愈合。
　　 第三部分為ProTa促進(jìn)人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明ProTa可以促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。
　　 第四部分為ProTa對糖尿病的預(yù)防作用研究。本部分實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為雌性組、雄性組,各組再分別隨機(jī)分為PBS對照組、ProTa處理組。各組先用ProTa(5μg)腹腔注射15天后再用STZ誘導(dǎo)