糖尿病腎病大鼠VEGF、MMP9、TIMP1的表達(dá)及拜新同對(duì)其表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察STZ誘導(dǎo)的糖尿病腎病(DN)模型大鼠腎組織VEGF、MMP9／TIMPl的表達(dá)狀況，以及鈣離子拮抗劑拜新同對(duì)其表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討VEGF、MMP9／TIMPl在DN發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用，以及拜新同對(duì)腎臟保護(hù)作用的機(jī)制。 方法：雄性Wistar清潔級(jí)健康大鼠30只，隨機(jī)分為3組：N組為正常對(duì)照組(10只)；DN組為糖尿病腎病模型組(10只)；拜新同組為糖尿病腎病拜新同干預(yù)組(10只)。糖尿病模型制備采用鏈脲佐菌素(

2、Sigma公司)溶于枸櫞酸緩沖液(0.1mmol／1，PH 4.5)，按50mg／Kg空腹腹腔內(nèi)注射，如72小時(shí)后測(cè)血糖≥16.7mmol／1為糖尿病模型成功。4周后測(cè)24小時(shí)尿蛋白定量，當(dāng)≥30mg／24h定為糖尿病腎病模型成功，模型未成功者剔除。模型成功后開始給予藥物干預(yù)實(shí)驗(yàn)，即給予拜新同組拜新同15mg／Kg.d灌胃，每日上午一次，非干預(yù)組每日以等量清水灌胃。拜新同組干預(yù)前后均測(cè)量平均尾動(dòng)脈壓。于第14天和28天各組均分別處死5只

3、大鼠，處死前1天放入代謝籠收集24h尿標(biāo)本，離心后取上清液，置-70℃冰箱保存，以待測(cè)尿蛋白。隨后將所有大鼠稱重，分別用戊巴比妥鈉45mg／kg腹腔注射；對(duì)麻醉后的大鼠心臟采血10m1，將血標(biāo)本離心取上清液，置-70℃冰箱保存，以待測(cè)血清肌酐。最后剖腹取出雙腎，迅速將大鼠左腎稱重，留取腎臟皮質(zhì)腎組織數(shù)小塊以10％甲醛固定后石蠟包埋，4um切片做HE、MASSON染色及免疫組化檢測(cè)大鼠腎臟VEGF的表達(dá)。取右腎分離皮質(zhì)后速凍于液氮中封存用

4、于RT-PCR檢測(cè)VEGF、MMP9、TIMPlmRNA的表達(dá)。 結(jié)果：①與正常組比較， DN組大鼠血糖、平均動(dòng)脈收縮壓、尿蛋白定量、血肌酐均顯著上升(P<0.01)；②與正常組比較，DN組大鼠腎組織腎小球肥大，腎小球毛細(xì)血管袢的毛細(xì)血管開放不良，ECM增多，腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，并隨病程進(jìn)展病變程度加重；③與正常組比較，DN組大鼠腎組織內(nèi)VEGF的蛋白表達(dá)及VEGFmRNA表達(dá)均顯著增強(qiáng)(P<0.05或P<0.01)，④與正常

5、組比較，4周DN組大鼠腎組織內(nèi)MMP9、TIMPl mRNA表達(dá)均顯著增強(qiáng)(P<0.05或P<0.01)，而MMP9／TIMPl的比值明顯下降(P<0.05)⑤與DN組比較，拜新同組大鼠腎組織中VEGF表達(dá)均有下調(diào)(P＜0.05或P<0.01)；4周拜新同組大鼠腎組織：MMP9、TIMPl mRNA表達(dá)也顯著增強(qiáng)(P＜0.05或P＜0.01)，而MMP-9／TIMP-1比值顯著升高(P＜0.05)。⑥模型組腎組織VEGFmRNA水平與2

6、4小時(shí)尿蛋白呈明顯正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)Y為0.672和0.748，p<0.05)，VEGFmRNA水平與MMP-9／TIMP-l的比值呈明顯負(fù)相關(guān)(相關(guān)系數(shù)Y分別為-0.727和-0.711，p＜0.05)結(jié)論：①DN大鼠蛋白尿增多，血壓、血肌酐升高的同時(shí)也出現(xiàn)了VEGF、MMP9及TIMPl的表達(dá)增高，MMP9／TIMPl比值下降，提示：VEGF、MMP9／TIMPl均參與了DN發(fā)生的病理生理過(guò)程。②拜新同干預(yù)后，DN大鼠蛋白尿和血壓、血