小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過(guò)程中MGL表達(dá)及分布的研究.pdf

1、目的：
　　 皮膚損傷愈合是一個(gè)連續(xù)而又復(fù)雜的生理過(guò)程,其大致可分為三個(gè)階段:急性滲出期、纖維增生期和組織重建期。在急性滲出期,各種類型的炎癥細(xì)胞,例如中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,浸潤(rùn)到損傷區(qū)域參與清除損傷壞死組織、異物及入侵的病原體等。在纖維增生期,肌纖維母細(xì)胞主要參與損傷組織的修復(fù)。許多實(shí)驗(yàn)證實(shí),在皮膚損傷愈合過(guò)程中有各種各樣的細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子和趨化因子的參與。研究表明內(nèi)源性大麻素系統(tǒng)廣泛參與炎癥反應(yīng)。內(nèi)源性大麻素水解酶主要有兩

2、種,即脂肪酸酰胺水解酶(FAAH)和單酰基甘油脂肪酶(MGL)。MGL是一種重要的內(nèi)源性大麻素水解酶,其主要作用是水解花生四烯酸甘油酯(2-AG)。有研究證實(shí),MGL在嚙齒類動(dòng)物的腦組織中高度表達(dá),并且在維持內(nèi)源性大麻素水平方面起到重要作用。到目前為止,尚未發(fā)現(xiàn)有關(guān)MGL在皮膚損傷愈合過(guò)程中的研究。本實(shí)驗(yàn)首次研究小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過(guò)程中不同損傷時(shí)間段MGL的表達(dá)和分布情況,探討MGL在皮膚損傷愈合過(guò)程中的作用及其應(yīng)用于損傷時(shí)間推斷的可能性

3、。
　　 實(shí)驗(yàn)材料與方法：
　　 健康成年雄性BALB/c小鼠45只,體質(zhì)量35～40g,隨機(jī)分為9組。其中8組為皮膚切創(chuàng)組,另1組為對(duì)照組。腹腔注射戊巴比妥鈉,背部剪毛處理后,常規(guī)手術(shù)消毒,在背部中央做一縱行長(zhǎng)1.5cm皮膚全層切口,深達(dá)筋膜。傷后每只小鼠單獨(dú)飼養(yǎng),防止感染,保持12h的晝夜交替生活節(jié)律。分別于傷后6h、12h、1d、3d、5d、7d、10d和14d將小鼠麻醉后脫頸椎處死,取傷口處1.5cm×1.0cm

4、皮膚組織。各組5只小鼠的皮膚樣本均分為兩部分,一部分用于HE染色和免疫熒光染色,另一部分用于Western blot和real-time PCR檢測(cè)。對(duì)照組5只小鼠麻醉后背部剪毛,不做切創(chuàng),取相同部位同等大小皮膚。應(yīng)用免疫熒光,Western blot及real-time PCR技術(shù)檢測(cè)小鼠皮膚切創(chuàng)后不同時(shí)間MGL表達(dá)變化情況,以非切創(chuàng)小鼠皮膚組織作對(duì)照,顯微鏡×400倍下,在損傷區(qū)及損傷周邊區(qū)隨機(jī)選取10個(gè)視野,計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)、陽(yáng)性細(xì)胞

5、數(shù)及陽(yáng)性細(xì)胞率。應(yīng)用Scion image軟件測(cè)各片段的平均光密度值,測(cè)得數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示。用SPSS13.0 forWindows進(jìn)行單因素方差分析,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 正常小鼠皮膚的表皮、毛囊及皮脂腺均表達(dá)MGL。皮膚切創(chuàng)后6～12h,在皮膚損傷區(qū)及其周邊區(qū)可見(jiàn)大量中性粒細(xì)胞表達(dá)MGL;傷后1～5d,MGL陽(yáng)性細(xì)胞主要以巨噬細(xì)胞為主;傷后7～14d,MGL主要表達(dá)

6、在肌纖維母細(xì)胞中。MGL陽(yáng)性細(xì)胞率于5d達(dá)高峰。中性粒細(xì)胞表達(dá)MGL的陽(yáng)性率于12h達(dá)高峰;巨噬細(xì)胞表達(dá)MGL的陽(yáng)性率于5d達(dá)高峰;肌纖維母細(xì)胞表達(dá)MGL的陽(yáng)性率于7d達(dá)高峰。經(jīng)Western blot檢測(cè)顯示,對(duì)照組及各個(gè)損傷時(shí)間段小鼠皮膚都有MGL陽(yáng)性條帶,其中5d為MGL蛋白表達(dá)高峰。Real-time PCR結(jié)果顯示,對(duì)照組及各個(gè)損傷時(shí)間段小鼠皮膚都有MGLmRNA表達(dá),其中5d為表達(dá)高峰。
　　 結(jié)論：