小鼠皮膚切創(chuàng)愈合與磷酸化p38MAPK表達的時間相關性研究.pdf

1、目的： 皮膚損傷愈合是一個復雜的過程，包括血液成分凝集、炎癥、肉芽組織形成、新生上皮覆蓋、毛細血管生成、纖維化、結締組織收縮等過程。p38MAPK(p38mitogen-activated protein kinase，p38MAPK)為絲裂酶原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)家族的一個重要的亞族，可通過細胞性的壓力和炎癥刺激發(fā)生磷酸化而激活，與重要的細胞反應有關，比如炎

2、性反應和凋亡。本研究應用免疫組織化學和Western blot的方法，檢測小鼠皮膚損傷區(qū)損傷后各時間磷酸化p38MAPK(phospho-p38MAPK，p-p38MAPK)的表達情況，探討磷酸化p38MAPK在皮膚損傷愈合中的作用及其在損傷時間推斷上應用的可能性。 實驗材料與方法: 健康成年清潔級昆明系小鼠33只，體重35～40g，隨機分為11組，其中1組為正常對照組。乙醚氣體吸入麻醉，背部剪毛處理后，在背部中央做一縱

3、行長1.5cm皮膚全層切口，深達筋膜。分別于傷后0h、3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、10d和14d將小鼠脫頸椎處死，取傷口處1.5cm×1.0cm皮膚組織。每組1/2皮膚固定后石蠟包埋，制作5μm連續(xù)切片；另1/2皮膚用冷生理鹽水清洗后加蛋白裂解液勻漿，用于Western blot蛋白印跡分析。應用免疫組織化學和Western blot的方法檢測30例小鼠皮膚，切創(chuàng)后各時間磷酸化p38MAPK表達情況，以非切創(chuàng)小鼠皮膚組織

4、作對照，顯微鏡×400倍下，在損傷區(qū)及損傷周邊區(qū)隨機選取10個視野，計數細胞總數、陽性細胞數及陽性細胞率。應用Fluochem V2.0軟件測各片段的平均光密度值，測得數據用均數±標準差(x±s)表示。用SPSS11.0 for Windows進行單因素方差分析，以P<0.05為差異有顯著性意義。 結果: 正常組織內含有少量的磷酸化p38MAPK。傷后6h，皮膚中可見少數多核粒細胞表達磷酸化p38MAPK。傷后12～24

5、h，大量浸潤的多核粒細胞和部分單核細胞磷酸化p38MAPK呈陽性。傷后1～5d隨著時間的延長，磷酸化p38MAPK陽性細胞主要以單核細胞和成纖維細胞為主。傷后5～14d磷酸化p38MAPK表達主要在成纖維細胞中。傷后0～3h，磷酸化p38MAPK陽性細胞比率比較低，隨著傷后時間的延長，磷酸化p38MAPK陽性率逐漸增加，12h達到高峰。傷后1～5d一直呈高表達狀態(tài)，傷后3d時最高。傷后7～14d，磷酸化p38MAPK陽性率逐漸下降。除傷

6、后3d與5d陽性細胞率無顯著性差異外(P>0.05)，其它各組與相鄰上組的陽性細胞數及陽性細胞率差異均有顯著性意義(P<0.05)。Western blot的結果顯示正常皮膚內有磷酸化p38MAPK的表達。傷后0～12h磷酸化p38MAPK蛋白含量逐漸增高，12h達到峰值。傷后1～5d磷酸化p38MAPK以3d時蛋白含量較高，傷后7～14d蛋白含量逐漸下降。除0h與對照組間平均光密度值差異無顯著性意義外(P>0.05)，其余各組間平均光