下丘腦CB1R及內(nèi)源性大麻素水解酶參與T2DM雄性獼猴HPA軸功能調(diào)節(jié).pdf

1、目的：下丘腦-垂體-腎上腺(hypothalamo-pituitary-adrenal，HPA)軸作為機(jī)體能量代謝的調(diào)節(jié)中樞，在2型糖尿病發(fā)生過(guò)程中起重要作用。下丘腦內(nèi)分布有大量大麻素受體，大麻素系統(tǒng)可廣泛調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元的功能。目前關(guān)于大麻素系統(tǒng)對(duì)HPA軸的作用研究較少，因此大麻素系統(tǒng)對(duì)HPA軸的作用在2型糖尿病發(fā)病機(jī)制中的研究具有重要價(jià)值。
　　本文選擇經(jīng)高脂飲食誘導(dǎo)24月，成功建立的2型糖尿病及糖尿病前期川西亞種雄性獼

2、猴，研究其下丘腦、垂體及腎上腺脂肪酸酰胺水解酶(fatty acid amide hydrolase，F(xiàn)AAH)、單酰甘油酯酶(monoglycerol lipase，MAGL)、大麻素1型受體(cannabinoid1 receptor，CB1R)、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(corticotropin releasing hormone，CRH)、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素受體(corticotropin releasing hormo

3、ne receptor1，CRHR1)、促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropic hormone，ACTH)、促腎上腺皮質(zhì)激素受體(adrenocorticotropic hormone receptor, ACTHR)、糖皮質(zhì)激素受體(glucocorticoids receptor, GR)及糖皮質(zhì)激素的表達(dá)變化，據(jù)此探討2型糖尿病進(jìn)程中，(1) HPA軸功能變化;(2)內(nèi)源性大麻素受體及水解酶在HPA軸中的作用。<

4、br>　　方法：將15只川西亞種雄性獼猴，根據(jù)空腹血糖水平及2小時(shí)餐后血糖分為健康組（5只），糖尿病前期組（5只）及顯性糖尿病組（5只）。經(jīng)麻醉處死后，取下丘腦、垂體及腎上腺固定或低溫凍存。HE染色檢測(cè)組織病理變化，免疫組織化學(xué)SABC藍(lán)色顯色法檢測(cè)蛋白質(zhì)表達(dá)分布及水平，蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)蛋白質(zhì)表達(dá)量，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)基因相對(duì)表達(dá)量，免疫酶聯(lián)吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)腎上腺皮質(zhì)醇水平。
　　結(jié)果：組織形態(tài)學(xué)觀(guān)察顯示，從健康到糖尿病前期再到顯

5、性糖尿病的獼猴出現(xiàn)下丘腦室旁核神經(jīng)元萎縮，顯性糖尿病獼猴神經(jīng)垂體形成較多少量均質(zhì)紅染團(tuán)塊，腺垂體嗜酸性細(xì)胞增多，腎上腺束狀帶細(xì)胞呈漸進(jìn)性腫脹的病變特征。
　　免疫組化染色結(jié)果顯示:各組獼猴下丘腦室旁核均分布有CRH、CB1R、FAAH及MAGL，CRHR1分布于各組獼猴神經(jīng)垂體，ACTH分布于各組獼猴腺垂體，各組獼猴腎上腺束狀帶分布有ACTHR，GR分布于糖尿病前期及顯性期獼猴下丘腦室旁核及腺垂體;從健康、前期到顯性，下丘腦室旁核

6、CRH積分光密度值逐漸減少(P＜0.05)，神經(jīng)垂體CRHR1積分光密度值先降低后升高(P＜0.01)，腺垂體ACTH積分光密度值先下降后恢復(fù)至健康水平(P＜0.01)，腎上腺束狀帶ACTHR積分光密度值呈逐漸升高的趨勢(shì)(P＜0.05)，下丘腦室旁核及腺垂體GR積分光密度值逐漸降低(P＜0.05)，下丘腦室旁核CB1R積分光密度值逐漸降低(P＜0.01)，F(xiàn)AAH表達(dá)逐漸增多(P＞0.05)，MAGL表達(dá)逐漸增多(P＜0.05)。

7、>　　蛋白質(zhì)印跡統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示:從健康、前期到顯性，下丘腦CRH及GR蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)量逐漸減少(P＜0.05)，而垂體ACTH、腎上腺ACTHR逐漸增多(P＜0.05)，垂體CRHR1呈先減少后增多的趨勢(shì)(P＜0.01)，下丘腦CB1R蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)量逐漸減少(P＜0.01)，下丘腦FAAH及MAGL逐漸增多(P＜0.01)。
　　實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示:從健康、前期到顯性，下丘腦CRH基因相對(duì)表達(dá)量逐漸減少(P＜0.01)，垂

8、體CRHR1基因相對(duì)表達(dá)量先降低后升高(P＜0.01)，垂體ACTH基因(POMC)相對(duì)表達(dá)量呈顯著升高趨勢(shì)(P＞0.05)，腎上腺ACTHR基因(MC2R)相對(duì)表達(dá)量呈逐漸降低趨勢(shì)(P＜0.01)，皮質(zhì)醇合成限速酶11β-羥基類(lèi)固醇脫氫酶基因（CYP11B1）相對(duì)表達(dá)量逐漸升高(P＜0.05)，下丘腦及垂體GR基因(NR3C1)相對(duì)表達(dá)量呈逐漸下降趨勢(shì)(P＞0.05); CB1R基因（CNR1）相對(duì)表達(dá)量在糖尿病前期顯著下調(diào)，顯性期則

9、進(jìn)一步下調(diào)(P＜0.05); FAAH(FAAH)先減少后增多(P＞0.05)，MAGL(MGLL)相對(duì)表達(dá)量逐漸增多(P＜0.01)。
　　免疫酶聯(lián)吸附試驗(yàn)結(jié)果顯示，腎上腺皮質(zhì)醇含量從健康到前期及顯性期逐漸升高(P＜0.01)。
　　結(jié)論：從健康、前期到顯性，HPA軸分泌功能逐漸增強(qiáng)，糖皮質(zhì)激素負(fù)反饋對(duì)HPA軸的抑制作用減弱。同時(shí)，CB1R表達(dá)逐漸減少，大麻素水解酶表達(dá)逐漸增多，表示在2型糖尿病發(fā)生過(guò)程中，減弱了CB1R及