農(nóng)桿菌介導(dǎo)家稗丙酮酸磷酸二激酶（PPDK）基因小麥轉(zhuǎn)化體系優(yōu)化的研究.pdf

1、對(duì)受體基因型敏感性的依賴，制約農(nóng)桿菌介導(dǎo)小麥?zhǔn)荏w材料的獲取范圍，外植體材料獲取途徑的單一，限制了受體材料的獲取數(shù)量，現(xiàn)有小麥轉(zhuǎn)化體系不具備通用性，造成農(nóng)桿菌介導(dǎo)小麥轉(zhuǎn)化的低效率。低效率導(dǎo)致小麥基因轉(zhuǎn)化滯后于其他作物。為實(shí)現(xiàn)對(duì)小麥基因組的C4改造，提高小麥的光合效率，必須突破外植體取材限制，提高小麥的轉(zhuǎn)化效率。本研究以擴(kuò)大外植體數(shù)量，鑒定敏感型受體小麥品種為研究基礎(chǔ)，針對(duì)限制小麥轉(zhuǎn)化效率的因素:受體因素、載體類(lèi)型、侵染因素、分化因素、隨機(jī)

2、因素，通過(guò)統(tǒng)計(jì)Gus基因的表達(dá)，鑒定各限制因素的最高表達(dá)效率，確定體系優(yōu)化條件，提高轉(zhuǎn)化效率，獲得轉(zhuǎn)化植株，初步建立一套成熟胚愈傷、幼胚愈傷相結(jié)合的高效、通用的轉(zhuǎn)化程序。 結(jié)果如下: 1)濟(jì)麥21、山東01-35、邯鄲3475、師欒02-l、晉57的成熟胚誘導(dǎo)愈傷的成愈率在60％以上，可增加成熟胚的誘導(dǎo)基數(shù)提高外植體數(shù)，誘導(dǎo)外植體作為優(yōu)化體系材料；14個(gè)幼胚材料的成愈率在85％以上，可作為主要轉(zhuǎn)化材料。

3、 2)對(duì)農(nóng)桿菌侵染毒力鑒定，農(nóng)桿菌株系C58c1的毒力水平適宜侵染。對(duì)34個(gè)成熟胚及14個(gè)幼胚的愈傷組織侵染轉(zhuǎn)化，揚(yáng)麥10、揚(yáng)麥158、師欒02-1、石家莊5號(hào)、周麥18、山東01-35、泰山008、Y9-63、邯鄲3475的轉(zhuǎn)化植株經(jīng)。PCR檢測(cè)，丙酮酸磷酸二激酶基因、hpt因能夠表達(dá)，為敏感型受體小麥材料；幼胚愈傷組織揚(yáng)麥10、揚(yáng)麥158、成熟胚愈傷師欒02-1,Gus基因能夠表達(dá)，且恢復(fù)培養(yǎng)14d，Gus基因的表達(dá)效果較好，為體

4、系優(yōu)化材料； 3)以揚(yáng)麥10、揚(yáng)麥158、師欒02-1為材料的轉(zhuǎn)丙酮酸磷酸二激酶轉(zhuǎn)化體系中，預(yù)培養(yǎng)60d的揚(yáng)麥158，調(diào)節(jié)菌液濃度OD600 0.6-0.8，侵染40一50min，再生愈傷率和Gus基因表達(dá)率最高；預(yù)培養(yǎng)60d的揚(yáng)麥10，菌液濃度OD600 0.5-0.7，侵染30-40min，再生愈傷率和6us基因表達(dá)率最高；預(yù)培養(yǎng)180d以上的師欒02-1，調(diào)節(jié)菌液濃度OD600 0.4-0.6，侵染20-30min，再