非小細(xì)胞肺癌中淋巴細(xì)胞浸潤和CTGF表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系.pdf

1、背景與目的:肺癌已經(jīng)成為世界上最常見的腫瘤死因之一，肺癌的主要組織學(xué)類型是非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，包括鱗癌、腺癌和大細(xì)胞癌，其次為小細(xì)胞肺癌。數(shù)據(jù)顯示肺癌的發(fā)病率和死亡率居于世界首位。盡管手術(shù)、化療和放療的聯(lián)合治療近年來不斷發(fā)展，但Ⅰ-ⅢA期的NSCLC患者經(jīng)過手術(shù)及術(shù)后治療，還是有大約65％的病人在術(shù)后2年內(nèi)死亡或者發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，肺癌的5年生存率也僅在10％左右徘徊，嚴(yán)重危害人類的健康。
　　 目前的研究表明，腫瘤發(fā)生發(fā)展

2、不但和腫瘤本身惡性生物學(xué)行為有關(guān)，腫瘤微環(huán)境中基質(zhì)成分的改變也發(fā)揮重要的作用。腫瘤微環(huán)境是由癌細(xì)胞和多種基質(zhì)細(xì)胞、細(xì)胞因子、趨化因子等組成。其中基質(zhì)細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞、免疫細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓來源未成熟細(xì)胞等；許多腫瘤相關(guān)的免疫細(xì)胞都是一把雙刃劍，譬如已經(jīng)了解的巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞和細(xì)胞毒性T細(xì)胞，一方面，這些免疫細(xì)胞可以識別腫瘤相關(guān)抗原，激活細(xì)胞毒性T細(xì)胞，發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)；另一方面，這些免疫細(xì)胞還能建立免疫耐受，甚至通過增加血管生成和侵

3、犯細(xì)胞外基質(zhì)而促進腫瘤生長和轉(zhuǎn)移。腫瘤組織局部免疫微環(huán)境的變化與患者術(shù)后復(fù)發(fā)和長期生存等關(guān)系密切，其中腫瘤組織中浸潤的T淋巴細(xì)胞在很多腫瘤中的作用已經(jīng)得到驗證，并認(rèn)為淋巴細(xì)胞的浸潤能夠減少術(shù)后復(fù)發(fā)。雖然腫瘤周圍存在淋巴細(xì)胞的浸潤，但腫瘤仍能生長提示腫瘤的局部免疫功能可能失衡。目前關(guān)于T淋巴細(xì)胞在NSCLC腫瘤局部表達(dá)及其對預(yù)后關(guān)系的報道還比較少。
　　 結(jié)締組織生長因子(CTGF)是CCN(Cyr61、CTGF、Nov)家族的一

4、種分泌型蛋白，涉及到多種生物學(xué)過程，譬如：血管生成、粘附、遷移和細(xì)胞凋亡等。有研究證明，CCN蛋白參與腫瘤發(fā)生過程，在多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)CCN蛋白上調(diào)或下調(diào)表達(dá)，提示CCN蛋白表達(dá)對腫瘤起正向或負(fù)向調(diào)節(jié)作用。CCN家族蛋白是一種多模塊結(jié)構(gòu)，其在不同的腫瘤組織中有著不同的生物學(xué)行為及功能。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，CTGF與細(xì)胞外基質(zhì)相互作用，調(diào)節(jié)多種組織惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展、血管生成及浸潤轉(zhuǎn)移，CTGF的表達(dá)水平與腫瘤的預(yù)后及術(shù)后復(fù)發(fā)密切相關(guān)。而有關(guān)

5、CTGF表達(dá)水平及其對NSCLC預(yù)后關(guān)系的研究更是鮮有報道。
　　 本研究采用免疫組織化學(xué)染色法檢測NSCLC腫瘤組織中T淋巴細(xì)胞浸潤及CTGF的表達(dá)情況，并分析二者與預(yù)后的關(guān)系。
　　 材料與方法:資料收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2004年1月1日-2007年12月31日手術(shù)切除的非小細(xì)胞肺癌標(biāo)本131例，均經(jīng)術(shù)后病理確診。所有病例術(shù)前均未接受化放療治療，且無明顯心、腎、肝及神經(jīng)系統(tǒng)等影響生命的疾患。術(shù)后開始隨訪，截止日期

6、為2010年8月31日；生存時間以月為單位，計算自手術(shù)之日至死亡或最后隨訪時間。并記錄患者的吸煙史及家族史等資料。
　　 實驗方法和結(jié)果判定所有切除標(biāo)本首先用10％甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，4μm連續(xù)切片進行SP免疫組織化學(xué)檢測。SP試劑盒、DAB顯色試劑盒、鼠抗人CD3單克隆抗體、鼠抗人CTGF單克隆抗體均為北京中杉金橋生物技術(shù)公司產(chǎn)品。操作步驟參照試劑盒說明書進行。以PBS代替一抗作為陰性對照。CD3蛋白為胞膜著色，染色為

7、棕黃色或棕褐色顆粒，陽性染色細(xì)胞<20％即為低表達(dá)，陽性染色細(xì)胞≥20％則為高表達(dá)。CTGF蛋白為胞膜和胞漿著色，染色為棕黃色或棕褐色顆粒，陽性染色細(xì)胞<10％即為低表達(dá)，陽性染色細(xì)胞≥10％則為高表達(dá)。
　　 統(tǒng)計學(xué)處理統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS17.0軟件分別進行x2檢驗、Kaplan-Merrier生存分析和Cox模型多因素生存分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1.總體生存率在隨訪時

8、間超過3年的患者中，總體生存率為50.4％(58/115)。
　　 2.CD3和CTGF在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及與臨床病理特征的關(guān)系：126例標(biāo)本可評價CD3染色效果，其中高表達(dá)76例(60.3％)，低表達(dá)50例(39.7％)；122例標(biāo)本可評價CTGF染色效果，其中高表達(dá)35例(28.7％)，低表達(dá)87例(71.3％)。采用列聯(lián)表分析方法，CD3和CTGF的表達(dá)與患者的年齡、性別、組織學(xué)類型和臨床分期在統(tǒng)計學(xué)上均無明顯差異。<

9、br>　　 3.單因素Kaplan-Meier生存曲線分析：CD3生存曲線分析顯示，高表達(dá)組與患者預(yù)后顯著正相關(guān)，高表達(dá)組術(shù)后累計生存率高于低表達(dá)組，差異顯著。CTGF生存分析曲線顯示，高表達(dá)組與患者預(yù)后亦呈正相關(guān)性，高表達(dá)組預(yù)后好，患者生存率較高，差異具有有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 4.肺癌預(yù)后的Cox模型多因素分析：以患者的年齡、性別、組織學(xué)類型、臨床分期、手術(shù)切緣、肺癌組織中CD3+T細(xì)胞密度和CTGF表達(dá)水平為變量，進行Co