腎臟缺血再灌注損傷及其實驗治療學(xué)研究.pdf

1、急性腎功能衰竭(ARF)是臨床上的危重癥，發(fā)病率很高，其中住院病人的5％到30～50％住入ICU病房，盡管目前治療技術(shù)有了明顯的進步，但是ARF的發(fā)病率和死亡率仍然很高，近40年來未明顯降低。其中缺血再灌注損傷(IRI)是引起自身和移植腎臟發(fā)生ARF的主要原因之一，導(dǎo)致腎臟IRI的原因有心血管疾病、膿毒癥、創(chuàng)傷、休克、脫水及外科手術(shù)等。此外，缺血再灌注損傷在移植器官發(fā)生急性排斥反應(yīng)和器官功能喪失等方面有著重要意義，可以明顯增加其危險性，

2、導(dǎo)致移植腎臟出現(xiàn)延遲功能衰竭。近年來隨著各種臟器尤其腎臟移植手術(shù)的增加，腎臟缺血再灌注損傷的發(fā)病率明顯增加．說明臨床上缺乏有效防治缺血性急性腎功能衰竭的藥物，因此研究對缺血再灌注性腎損傷有預(yù)防或治療作用的藥物具有重要的臨床意義。本研究在以往系列研究的基礎(chǔ)上，以缺血再灌注腎臟損傷大鼠為模型，、觀察藥物對腎臟缺血再灌注損傷的實驗預(yù)防治療學(xué)作用及其可能的作用機制。 一、腎臟缺血再灌注模型的建立及中藥的初步篩選 1、雄性Wist

3、ar大鼠麻醉后切除其右側(cè)腎臟，恢復(fù)兩周后，常規(guī)消毒麻醉，左側(cè)腹部切口，分離左腎動靜脈。假手術(shù)組(Sham)只在左腎動靜脈處穿線不夾閉，缺血組(Isc)用無創(chuàng)動脈夾夾閉左腎動靜脈45rain造成急性缺血，缺血再灌注組(FR)用無創(chuàng)動脈夾夾閉左腎動靜脈45min后再放開24小時造成急性缺血再灌注腎損傷大鼠模型。 2、應(yīng)用缺血再灌注模型對3種中藥進行初步篩選，實驗大鼠分為I／R組、1號藥、2號藥、3號藥組，檢測再灌注24小時時腎功能情

4、況，2、3號藥能夠明顯改善腎功能，與FR組比較差別有統(tǒng)計學(xué)意義；1號藥雖然也能降低血清尿素氮、肌酐水平，但是與FR組比較，差別無統(tǒng)計學(xué)意義。因此，淘汰1號藥，對2、3號藥繼續(xù)進一步研究 二、中藥對缺血再灌注腎臟損害的作用 1．中藥對缺血再灌注腎臟損害的保護作用 本實驗以缺血再灌注腎臟損傷大鼠為模型，從整體水平觀察中藥對缺血再灌注腎臟損害的實驗預(yù)防治療學(xué)效果，從組織細胞水平觀察藥物對腎組織細胞增生、凋亡以及ET-1

5、系統(tǒng)表達的影響。實驗設(shè)計假手術(shù)組、缺血再灌注模型組、中藥2號、3號組，灌胃給藥每天2次，持續(xù)給藥3d觀察其對大鼠的血清尿素氮、肌酐水平、腎組織病理改變、血清ET-1水平、腎組織ET-1mRNA，ECEmRNA表達的影響，同時分別應(yīng)用免疫組化和原位雜交技術(shù)觀察了中藥對再灌注后腎組織細胞增生和凋亡的影響。結(jié)果表明，中藥可有效的降低血清尿素氮、肌酐水平，減輕腎小管及腎小管間質(zhì)病變程度，改善’腎功能，降低細胞的凋亡，促進細胞增生，但對細胞增殖指

6、數(shù)無明顯影響；同時降低血清ET-1水平，抑制組織ET-1，ECEmRNA的表達，與I／R組比較差別有統(tǒng)計學(xué)意義。提示2、3號中藥對缺血再灌注。腎臟損傷大鼠具有保護作用，此作用可能與其抑制血液及腎組織局部ET系統(tǒng)，減少細胞凋亡，促進細胞增生，加速細胞修復(fù)有關(guān)。 2、中藥對缺血再灌注。腎臟損傷大鼠腎組織KATP通道基因表達的影響 本實驗應(yīng)用RT-PCR繼續(xù)觀察了中藥對缺血再灌注腎臟損傷大鼠腎組織KATP亞型表達的影響，結(jié)果顯

7、示：在缺血再灌注24小時后。腎組織KATP通道亞型Kir6．1、Kir4．1、Kirl．1mRNA表達明顯上調(diào)，2號預(yù)防可下調(diào)高表達的Kir4．1、Kirl．1mRNA水平。3號藥預(yù)防可下調(diào)高表達Kir6．1、Kir4．1基因。表明中藥預(yù)防對缺血再灌注損傷腎臟的保護作用不僅與其有效的降低ET-1有關(guān)，還可能與其影響Kir基因表達有關(guān)。 結(jié)語，中藥預(yù)防治療缺血再灌注可改善腎功能，減輕腎小管間質(zhì)的病理改變，可能與其抑制細胞凋亡，促進

8、細胞增，抑制血液及’腎組織局部內(nèi)皮素系統(tǒng)水平，調(diào)節(jié)腎臟KATP通道基因表達有關(guān)。 三、埃他卡林對缺血再灌注。腎臟損害的作用 1．埃他卡林對缺血再灌注腎臟損害的保護作用 本實驗以缺血再灌注腎臟損傷大鼠為模型，從整體水平觀察埃他卡林對缺血再灌注腎臟損害的實驗預(yù)防治療學(xué)效果，從組織細胞水平觀察埃他卡林對。腎組織細胞增生、凋亡及ET-1系統(tǒng)表達的影響。實驗設(shè)計假手術(shù)組、缺血再灌注模型組、埃他卡林0．5、1．0、15、2．

9、0mg．kg-1．d44個劑量組，灌胃給藥每天2次，持續(xù)給藥3d，觀察其對大鼠的血清尿素氮、肌酐水平、腎組織病理改變、血清ET-1水平、腎組織ET-1，ECEmRNA表達的影響，同時應(yīng)用免疫組化和原位雜交技術(shù)觀察了埃他卡林對再灌注后腎組織細胞增生和凋亡的影響。結(jié)果表明，埃他卡林可有效的降低血清尿素氮、肌酐水平，減輕腎小管及腎小管間質(zhì)病變程度，同時降低缺血再灌注腎臟損傷后大鼠血清及組織ET-1，ECEmRNA表達水平，降低細胞的凋亡，促進

10、細胞增生，但對細胞增殖指數(shù)無明顯影響。 2．埃他卡林對缺血再灌注腎臟損傷大鼠腎組織KATP通道基因表達的影響本實驗應(yīng)用RT-PCR繼續(xù)觀察了埃他卡林對缺血再灌注腎臟損傷大鼠腎組織KATP亞型表達的影響，結(jié)果顯示：在缺血再灌注狀態(tài)下腎組織KATE通道亞型Kir6．1、Kir4．1、Kirl．1mRNA表達明顯上調(diào)，埃他卡林預(yù)防可下調(diào)高表達Kir6．1，Kir4．1、Kirl．1mRNA水平。表明埃他卡林預(yù)防對缺血再灌注損傷腎臟的保