肝臟缺血再灌注損傷對胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)上游通路的影響及丙泊酚的干預(yù)作用.pdf

1、第一部分肝臟缺血再灌注損傷對胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)游通路的影響 目的：L研究大鼠肝臟缺血再灌注損傷(HIRI)胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中上游通路信號蛋白表達(dá)的改變。 方法： 選用健康SD大鼠80只，隨機(jī)分為缺血再灌注組(I/R組)和對照組(C組)，每組40只。I/R組建立HIRI大鼠模型(肝門阻斷30 min后再灌注2 h)，C組除未行肝門阻斷外，其余操作同I/R組。分別測定肝門阻斷前(T1)及肝門阻斷30 min再灌注2 h

2、(T2)血糖(BG)、血清胰島素(Ins)濃度，并計算胰島素分泌指數(shù)(ISI)及胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)。于T2時點采用Western blot法檢測兩組大鼠肝組織胰島素受體β亞單位(IR β)、胰島素受體底物2(IRS-2)、磷酸肌醇3激酶(P13K)的p85亞基(p85)等胰島素信號蛋白及使用免疫沉淀法檢測IR β、IRS-2酪氨酸磷酸化蛋白表達(dá)及IRS-2與P13K相互作用的改變；同時檢測兩組大鼠骨骼肌IR β、胰島素受體

3、底物1(IRS-1)、p85等胰島素信號蛋白及IR β、IRS-1酪氨酸磷酸化蛋白表達(dá)及IRS-1與P13K的相互作用的改變。 結(jié)果： 與T1比較，兩組T2時BG均明顯升高(P<0.01)；但I(xiàn)/R組T2時BG升高比C組更為明顯(P<0.01)。與T1比較，I/R組T2點Ins無明顯變化；C組T2時Ins濃度明顯高于I/R組（P<0.05)。與T1比較，I/R組T2點ISI值明顯降低(P<0.01)。與T1比較，兩組在T

4、2時HOMA-IR明顯升高(P<0.01)。兩組大鼠T2點肝組織IR β、IRS-2和p85表達(dá)量均無明顯差異(P>0.05)；兩組大鼠T2點骨骼肌IR β、IRS-1和p85表達(dá)量均無明顯差異(P>0.05)。與C組比較，UR組肝組織在T2時IRβ、IRS-2酪氨酸磷酸化蛋白表達(dá)量及IRS-2與P13K的相互作用分別減少了32.2％(P<0.01)、47.7％(P<0.01)和55.6％(P<0.01)；骨骼肌組織IR β、IRS-1

5、酪氨酸磷酸化蛋白表達(dá)量及IRS-1與P13K的相互作用在T2時分別比C組減少了79％9P<0.01)、49％(P<0.01)和38％(P<0.01)。 結(jié)論： HIRI導(dǎo)致了胰島素分泌障礙，同時降低了肝臟和骨骼肌組織胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中信號分子IR β、IRS的酪氨酸磷酸化以及IRS與P13K的相互作用，從而干擾葡萄糖的代謝過程，這可能是HIRI后血糖升高的原因之一。 第二部分丙泊酚對肝臟缺血再灌注損傷致胰島素信

6、號轉(zhuǎn)導(dǎo)上游通路改變的干預(yù)作用 目的:研究丙泊酚對大鼠肝臟缺血再灌注損傷(刪)致胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)上游通路改變的影響。 方法： 選用健康SD大鼠80只，隨機(jī)分為丙泊酚組(P組)和缺血再灌注組(I/R組)，每組40只。建立HIRI大鼠模型(肝門阻斷30 min后再灌注2 h)，P組從肝門阻斷前20 min以10 mg·kg-1·h-1注入丙泊酚直至再灌注2 h結(jié)束，I/R組則等速注入等量生理鹽水。分別測定肝門阻斷前(T1

7、)及肝門阻斷30 min再灌注2 h(T2)的血糖(BG)、血清胰島素(Ins)的濃度，并計算胰島素分泌指數(shù)(ISI)及胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)。于T2時點采用Western blot法檢測檢測兩組大鼠肝組織胰島素受體β亞單位(IR β)、胰島素受體底物2(IRS-2)、磷酸肌醇3激酶(P13K)的p85亞基(p85)等胰島素信號蛋白量及使用免疫沉淀法檢測IR β、IRS-2酪氨酸磷酸化蛋白表達(dá)量及IRS-2與P13K相互作用的

8、改變；同時檢測兩組大鼠骨骼肌IR β、胰島素受體底物1(IRS-1)、p85等胰島素信號蛋白及IR β、IRS.1酪氨酸磷酸化蛋白表達(dá)量及IRS-1與P13K的相互作用的改變。 結(jié)果： 與T1比較，兩組T2時BG水平均明顯升高(P<0.01)；I/R組T1時BG水平與P組無明顯差異(p>0.05)，但T2時明顯升高(P<0.05)。與T1比較，兩組在T2時血清Ins無明顯變化(p>0.05)；I/R組T2時血清Ins水平

9、與P組無明顯差異(p>0.05)；但T2時111s水平明顯降低(P<0.05)。與T1比較，兩組T2時ISI值均明顯降低(P<0.01)；I/R組T1時ISI值與P組無明顯差異(p>0.05)，但T2時ISI明顯降低(P<0.01)。與Tl比較，兩組T2時HOMA-IR值明顯升高(P<0.01)；I/R組與P組相同時點比較，T1和T2時均無明顯差異(p>0.05)。兩組大鼠肝臟組織中IR β、IRS-2和p85亞基蛋白表達(dá)量均無明顯差異

10、。與P組比較，I/R組T2時肝臟組織中Tyr-IR β和Tyr-IRS2表達(dá)量分別減少了22.8％(P<0.01)和24.1％(P<0.01)，IRS-2與P13K的相互作用減少了23.9％(P<0.01)。兩組大鼠骨骼肌組織中IR β、IRS-1和p85亞基蛋白表達(dá)量無明顯差異。與P組比較，I/R組T2時點骨骼肌組織中Tyr-IR β和Tyr-IRSl表達(dá)量分別減少了34.9％(P<0.01)和24.2％(P<0.01)，IRS-1與