我國炎癥性腸病遺傳易感性和血清學(xué)標(biāo)志物的相關(guān)研究.pdf

1、炎癥性腸病(IBD)是一組病因不明的慢性腸道疾病，主要包括潰瘍性結(jié)腸炎(UC)和克羅恩病(CD)。近年在我國病例報告逐年增加，呈明顯上升趨勢。目前IBD的病因和發(fā)病機制尚不清楚，研究認為遺傳、環(huán)境、免疫三者相互作用參與IBD發(fā)病，并可能決定臨床表型。近年國內(nèi)外學(xué)者對IBD遺傳因素的研究發(fā)現(xiàn)基因突變除與疾病易感性相關(guān)外，與某些疾病表型也相關(guān)，如NOD2突變在回腸CD為多。作為第一個CD易感基因，NOD2的發(fā)現(xiàn)具有劃時代的意義，它提示IBD

2、發(fā)病與腸道細菌及自然免疫相關(guān)。DEFB1和ATG16L1屬免疫防御功能相關(guān)基因，有研究發(fā)現(xiàn)DEFB1多態(tài)性與CD相關(guān)，在我國尚無相關(guān)報道。ATG16L1作為新近確定的CD易感基因，在高加索人群研究中得到較好的重復(fù)，而在我國尚無相對大樣本的研究。 除遺傳因素之外，一些特異性抗體可能作為IBD與免疫反應(yīng)有關(guān)的表現(xiàn)而受到重視，包括抗中性粒細胞胞漿抗體(Antineutrophil cytoplasmic antibodies，p—AN

3、CA)、抗釀酒酵母菌抗體(Anti—saccharomyces cerevisiae antibodies，ASCA)、抗胰外分泌腺抗體(Pancreatic antibodies，PAB)和抗小腸杯狀細胞抗體(Goblet cell autoantibodies，GAB)等，四種抗體檢測在國外廣泛用于IBD的診斷，但在中國人群中報道較多的為p—ANCA和ASCA，二者聯(lián)合檢測診斷IBD敏感性較低，且不同中心的研究結(jié)果不甚一致，而PAB

4、和GAB國內(nèi)報道較少，且上述抗體與臨床表型的關(guān)系報道尚有爭議。 IBD為異質(zhì)性疾病，基于遺傳學(xué)異質(zhì)性和血清學(xué)異質(zhì)性的研究可準(zhǔn)確界定IBD臨床分型，有助于治療方案的細化和預(yù)后的判定。因此本研究從IBD遺傳易感性和相關(guān)抗體檢測著手，立足于國內(nèi)現(xiàn)有試驗條件，研究旨在： 1.探討自然免疫相關(guān)基因DEFB1和ATG16L1單核甘酸多態(tài)性與IBD遺傳易感性的關(guān)系以及與IBD臨床表型的可能關(guān)聯(lián)； 2.探討p—ANCA、ASCA

5、、PAB和GAB聯(lián)合檢測對IBD診斷及鑒別診斷的應(yīng)用價值以及與IBD臨床表型的可能關(guān)聯(lián)。 第一部分中國漢族人群ATG16L1和DEFB1基因多態(tài)性與炎癥性腸病遺傳易感性的關(guān)聯(lián)性研究。 方法：本研究采用醫(yī)院為基礎(chǔ)的病例一對照研究設(shè)計，對247例無血緣關(guān)系的我國漢族IBD患者(150例UC，97例CD)以及200例正常對照者，應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)—限制性片段長度多態(tài)性(Polymerase chain reaction—rest

6、ricted fragment lengthpolymophism，PCR—RFLP)方法和部分樣本(10％)測序方法，檢測DEFB1基因(rs11362和rs1800972位點)和ATG16L1基因(rs2241880和rs1045095位點)多態(tài)性，并分析上述基因多態(tài)性與IBD臨床特征的關(guān)系。 結(jié)果： 1、DEFB1基因rs11362多態(tài)與UC患病風(fēng)險增加相關(guān)，攜帶rs11362GG基因型個體患UC風(fēng)險是攜帶AA和G

7、A基因型個體的2.04倍(95％CI：1.32—3.06，P=0.0013)。 2、單體型分析表明攜帶DEFB1基因rs11362和rs1800972G—C單體型個體患UC風(fēng)險是攜帶A—C單體型個體的1.621倍(95％CI：1.010-2.610，P=0.035)； 3、基因型與表型關(guān)聯(lián)分析表明DEFB1基因rs11362多態(tài)與UC臨床表型相關(guān)，診斷年齡<25歲UC患者攜帶DEFB1基因rs11362位點GG基因型顯著

8、高于與正常對照(P=0.001，OR=3.29，95％CI：1.56—7.09)，病變累及全結(jié)腸者攜帶GG基因型顯著高于正常對照(P=0.003，OR=2.27，95％CI：1.31—3.91)，重度結(jié)腸炎患者攜帶GG基因型顯著高于正常對照(P=0.009，OR=2.55，95％CI：1.24—5.24)； 小結(jié)：DEFB1基因單核甘酸多態(tài)性不僅與我國漢族人群UC易感性相關(guān)，而且與發(fā)病早、重度及廣泛結(jié)腸炎相關(guān)。 第二部分

9、中國人炎癥性腸病血清學(xué)標(biāo)志物聯(lián)合檢測的臨床意義。 方法：本研究對217例IBD患者(UC108例，CD109例)、59例非IBD腸道疾病患者以及112例正常對照者，應(yīng)用ELISA法檢測ASCA，ⅡF法檢測p—ANCA、PAB和GAB。 結(jié)果： 1.不同抗體在IBD中分布：UC中p—ANCA和GAB陽性率分別為60.2％和30.6％，均高于CD、疾病對照和正常對照，CD中ASCA和PAB陽性率分別為34.9％和41

10、.3％，均高于UC、疾病對照和正常對照；p—ANCA陰性UC中僅有13.6％(6/44)病人GAB陽性，ASCA陰性CD中34.3％(24/70)病人PAB陽性； 2.四種抗體聯(lián)合檢測對IBD診斷的意義：p—ANCA和GAB單項檢測診斷UC敏感性分別為59.3％和27.8％，二者聯(lián)合檢測診斷UC敏感性可提高至64.8％；ASCA和PAB單項檢測診斷CD敏感性均為35.8％，二者聯(lián)合檢測診斷CD敏感性可提高至57.8％；

11、3.四種抗體聯(lián)合檢測對IBD鑒別診斷的意義：ASCA+p—ANCA—對于CD和UC的鑒別診斷敏感性57.8％，特異性96.3％，聯(lián)合PAB和GAB檢測特異性和陽性預(yù)測值均為100％，但敏感性僅為12.8％；p—ANCA+ASCA—對于UC和CD的鑒別診斷敏感性50％，特異性94.5％，聯(lián)合GAB和PAB檢測特異性和陽性預(yù)測值均達100％，但敏感性僅為19.4％； 4.四種抗體檢測在結(jié)腸CD和UC鑒別診斷中的意義：ASCA+p—A

12、NCA—診斷結(jié)腸CD敏感性、特異性分別為60％和96.3％，陽性預(yù)測值為28.6％，聯(lián)合PAB和GAB檢測雖特異性和陽性預(yù)測值均提高至100％，而敏感性僅為0.9％。p—ANCA+ASCA—鑒別UC的敏感性和特異性50％和94.5％，陰性預(yù)測值為28.9％，聯(lián)合GAB和PAB檢測特異性和陽性預(yù)測值均達100％，但敏感性僅為16.7％； 5.四種抗體檢測在IBD與非IBD腸病的鑒別診斷中的意義：各抗體單項檢測診斷IBD的特異性基本

13、在95％以上，其中GAB可達100％；對于聯(lián)合檢測而言，PAB和GAB組合診斷IBD的特異性96.6％，高于p—ANCA和ASCA組合； 6.四種抗體與IBD臨床特征的關(guān)系：未發(fā)現(xiàn)UC病人p—ANCA和GAB、CD病人ASCA與臨床特征有關(guān)。診斷年齡≤40組CD病人血清PAB陽性率為43.2％，診斷年齡>40歲組CD病人PAB陽性率20％，二者比較差異顯著(P=0.018)；有腸外表現(xiàn)者CD病人血清PAB陽性率明顯高于無腸外表現(xiàn)

14、者(58.8％vs31.5％，P=0.031)。 小結(jié)： 1、多數(shù)UC患者可檢測到p—ANCA和ASCA，多數(shù)CD患者可檢測到ASCA和PAB； 2、p—ANCA聯(lián)合GAB檢測可提高UC診斷的敏感性，ASCA聯(lián)合PAB檢測可提高CD診斷的敏感性； 3、四種抗體聯(lián)合檢測較p—ANCA和ASCA更有助于IBD的鑒別診斷，同時亦有助于結(jié)腸CD和UC的鑒別； 4、GAB檢測有助于IBD與非IBD腸道疾病的

15、鑒別； 5、PAB與CD發(fā)病早、腸外表現(xiàn)有關(guān)。 結(jié)論： 1、DEFB1基因單核甘酸多態(tài)性不僅與我國漢族人群UC易感性相關(guān)，而且與發(fā)病早、重度及廣泛結(jié)腸炎相關(guān)； 2、ATG16L1基因單核甘酸多態(tài)性與我國漢族人群IBD無關(guān)； 3、p—ANCA、ASCA、PAB和GAB四種抗體聯(lián)合檢測較p—ANCA和ASCA兩種抗體聯(lián)合檢測更有助于IBD的鑒別診斷，同時亦有助于結(jié)腸CD和UC的鑒別； 4、PA