白念珠菌酵母相和菌絲相ERG11基因的比較研究.pdf

1、　　目的：
　　驗(yàn)證已知的白念珠菌菌絲相細(xì)胞的理想培養(yǎng)條件；通過對(duì)氟康唑敏感程度不同的白念珠菌酵母相和菌絲相細(xì)胞氟康唑作用靶酶基因ERG11序列的比較研究,以探討兩種細(xì)胞形態(tài)在基因序列上的差異性,從而為白念珠菌的病原真菌學(xué)研究其實(shí)驗(yàn)對(duì)象的選擇(菌絲相或酵母相細(xì)胞)提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　以同一母體來源的16株對(duì)氟康唑敏感程度不同的白念珠菌作為研究對(duì)象(分別為CA-1,CA-2,…,CA-17,無CA-10),采

2、用RPMI1640培養(yǎng)基(含10%的小牛血清),37℃,連續(xù)傳代培養(yǎng)7天,共轉(zhuǎn)種12次,記錄不同觀察時(shí)間菌絲相和酵母相細(xì)胞數(shù),計(jì)算菌絲相細(xì)胞形成率。分別提取酵母相和菌絲相細(xì)胞的基因組DNA。設(shè)計(jì)7對(duì)引物,分段擴(kuò)增白念珠菌酵母相和菌絲相細(xì)胞的ERG11基因。擴(kuò)增產(chǎn)物單鏈變性后,進(jìn)行非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(PCR-SSCP),觀察結(jié)果并選擇兩種細(xì)胞形態(tài)間具有差異的片段行DNA序列測定。
　　結(jié)果：
　　1.以RPMI1640(

3、pH=7.5,含10%小牛血清)為培養(yǎng)基,37℃?zhèn)鞔囵B(yǎng)7天(轉(zhuǎn)種12次)后,每株白念珠菌的菌絲相細(xì)胞形成率均達(dá)99%以上；
　　2.ERG11的分段擴(kuò)增結(jié)果顯示每株白念珠菌均能擴(kuò)增出目的片段,不存在敏感菌株和耐藥菌株的差異；
　　3.SSCP分析及DNA序列測定結(jié)果顯示白念珠菌的酵母相和菌絲相細(xì)胞ERG11基因序列存在多位點(diǎn)的差異。
　　結(jié)論：
　　1.RPMI1640(pH=7.5,含10%小牛血清),37℃