殼寡糖誘導(dǎo)番茄抗交鏈孢菌及菌毒素提取研究.pdf

1、番茄果實(shí)營(yíng)養(yǎng)豐富，深受各國(guó)人民喜愛，但由于果實(shí)成熟后多漿汁而易受病原菌侵染，造成腐爛，特別是交鏈孢菌侵染后造成毒素殘留，對(duì)番茄的鮮食與加工都會(huì)造成重要損失，制約了番茄果實(shí)加工與保鮮產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。以生物源殼寡糖為誘抗劑的使用，對(duì)果蔬的保鮮提供了新思路。
　　本論文以殼寡糖為外源保鮮劑，以顯微觀察和分光光度計(jì)檢測(cè)等方法對(duì)番茄交鏈孢菌黑霉病進(jìn)行防治效果與機(jī)理的初步研究，同時(shí)針對(duì)交鏈孢菌的產(chǎn)毒素情況及其致病機(jī)制采用了高效液相和質(zhì)譜分析，結(jié)合

2、生物學(xué)檢測(cè)，確定毒素在致病菌侵染中的作用機(jī)理，為以生物技術(shù)防治交鏈孢菌的關(guān)鍵侵入因子提供理論基礎(chǔ)。首先考察了殼寡糖對(duì)交鏈孢菌絲和菌孢子的影響，結(jié)果表明:不同濃度(0.01 g/100mL、0.05g/100mL、0.1g/100mL)的殼寡糖對(duì)交鏈孢菌絲沒有抑制作用，并且濃度為0.05g/100mL時(shí)具有促進(jìn)作用;不同濃度的殼寡糖對(duì)菌孢子的萌發(fā)有明顯的抑制作用，且濃度為0.10 g/100mL時(shí)菌孢子幾乎不萌發(fā)。用不同濃度殼寡糖(0.0

3、1g/100mL、0.05g/100mL、0.1g/100mL)配制液體培養(yǎng)基培養(yǎng)交鏈孢菌，測(cè)定交鏈孢菌的過氧化氫酶(CAT)的活性，結(jié)果顯示1～3天過氧化氫酶的活性受到抑制，隨后過氧化氫酶活性上升，而且，殼寡糖濃度越高，過氧化氫酶活力越低。
　　利用展開劑（乙酸乙酯∶甲醇∶水=7∶2∶1，v/v/v）對(duì)粗毒素展開，經(jīng)顯色發(fā)現(xiàn)，有四種主要成分。粗毒素經(jīng)硅膠柱柱層析后，共收集到36瓶洗脫液，主要活性成分集中在10～19瓶。將收集的第

4、10～19瓶洗脫液合并，稱為精毒素。粗毒素經(jīng)液相色譜分析，成分較單一，主要含一種物質(zhì)，保留時(shí)間在3.492 min處。紅外光譜檢測(cè)表明，出峰主要在指紋吸收帶，交鏈孢菌中可能含有N-H，-CH2，C=C等基團(tuán)，集中在伸縮振動(dòng)區(qū)可能含C-O，C-N，C-C基團(tuán)。將粗毒素樣品，利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析，共檢測(cè)出七種主要有機(jī)化合物，其主要成分為環(huán)嗪酮(hexazinone)，化學(xué)分子式為C12H20N4O2，分子量為252.31，別名，林

5、草凈，是一種除草劑的主要成分。
　　毒素原液對(duì)番茄的4種防御酶POD、PPO、PAL、SOD都有明顯的抑制作用，而防御酶活性的降低是番茄抗病性下降的主要原因;將毒素原液稀釋，抑制作用減弱，當(dāng)稀釋到20倍時(shí)，防御酶活性反而增加。當(dāng)用0.05 g/100 mL濃度殼寡糖提前處理番茄時(shí)，再注入毒素原液，番茄的防御酶活性有所加強(qiáng)，并起到了對(duì)番茄果實(shí)抗病的效果。所以，毒素具有雙重作用，高濃度下對(duì)寄主的致病作用明顯，低濃度時(shí)反而能促進(jìn)植物防御