少孢節(jié)叢孢菌捕食器誘導(dǎo)及絲氨酸蛋白酶基因序列分析.pdf

1、捕食線蟲性真菌捕食線蟲主要是通過其特殊的結(jié)構(gòu)-捕食器來實(shí)現(xiàn)的。研究捕食器菌絲與普通營養(yǎng)菌絲氨基酸含量的區(qū)別:并在實(shí)驗(yàn)室條件下，用人工方法對(duì)捕食器進(jìn)行誘導(dǎo):并對(duì)少孢節(jié)叢孢菌的絲氨酸蛋白酶基因進(jìn)行探討，這對(duì)了解捕食器的構(gòu)造和捕食過程的機(jī)理具有重要意義。為此本課題利用生物化學(xué)和分子生物學(xué)方法，對(duì)少孢節(jié)叢孢菌(A.oligospora)主要進(jìn)行了以下相關(guān)內(nèi)容的研究，得出結(jié)果如下: 研究了氨基酸對(duì)捕食線蟲性真菌生長(zhǎng)的影響，發(fā)現(xiàn)不同種類的氨

2、基酸對(duì)少孢節(jié)叢孢菌(A.oligospora)菌絲生長(zhǎng)的影響不同。其中L-組氨酸(L-His)、DL-亮氨酸(DL-Leu)、L-亮氨酸(L-Leu)、L-異亮氨酸(L-Ile)可以明顯地促進(jìn)菌絲生長(zhǎng):DL-苯丙氨酸(DL-Phe)、L-苯丙氨酸(L-Phe)、DL-纈氨酸(DL-Val)、L-纈氨酸(L-Val)、L-色氨酸、L-蛋氨酸、L-賴氨酸、L-谷氨酸溶液有一定促進(jìn)作用；而L-蘇氨酸、L-谷氨酸(0.05g/L濃度)有明顯的抑

3、制作用。 采用多種氨基酸在固體CMA培養(yǎng)基上對(duì)少孢節(jié)叢孢菌捕食器的產(chǎn)生進(jìn)行了誘導(dǎo)，發(fā)現(xiàn)加入一定濃度某些種類的氨基酸后，可以導(dǎo)致少孢節(jié)叢孢菌產(chǎn)生捕食器，這種捕食器同樣可以捕食線蟲幼蟲。其中以濃度為0.05g/L的L-苯丙氨酸、L-蛋氨酸、DL-纈氨酸的誘導(dǎo)效果較好；L-蘇氨酸、L-異亮氨酸、L-亮氨酸、L-色氨酸和L-纈氨酸屬于中等；L-賴氨酸、L-谷氨酸和L-組氨酸溶液表現(xiàn)較差。而且氨基酸主要刺激新生菌絲產(chǎn)生捕食器。 通

4、過分析含捕食器菌絲和普通營養(yǎng)菌絲的氨基酸發(fā)現(xiàn):少孢節(jié)叢孢菌捕食器(菌環(huán)和菌網(wǎng))各種氨基酸的含量普遍都高于普通營養(yǎng)菌絲，含捕食器菌絲和普通營養(yǎng)菌絲每100mg干物質(zhì)中氨基酸的總量分別為31.86mg和20.58mg，這表明捕食器菌絲與普通營養(yǎng)菌絲二者的化學(xué)構(gòu)成不完全相同，普通營養(yǎng)菌絲在轉(zhuǎn)化成捕食器時(shí)，某些氨基酸的含量發(fā)生了改變，在被測(cè)樣品的各種氨基酸含量中，含捕食器菌絲中以纈氨酸(VAL)、亮氨酸(LEU)和苯丙氨酸(PHE)含量較高。

5、 利用特異性引物，對(duì)少孢節(jié)叢孢菌內(nèi)蒙古株的絲氨酸蛋白酶基因部分序列進(jìn)行了擴(kuò)增，并同Genbank中其它國內(nèi)外少孢節(jié)叢孢菌株絲氨酸蛋白酶基因相應(yīng)部分序列進(jìn)行了同源性比較構(gòu)建進(jìn)化樹。結(jié)果顯示:擴(kuò)增所得序列全長(zhǎng)為1108bp；少孢節(jié)叢孢菌內(nèi)蒙古株的基因序列與少孢節(jié)叢孢菌瑞典株(AY444597)和少孢節(jié)叢孢菌云南株(AF516146)的同源性分別為80.3％和84.1％；在進(jìn)化樹上，三個(gè)株的基因序列相聚較近，具有較高的親緣性。進(jìn)一步證實(shí)