水產(chǎn)養(yǎng)殖源氣單胞菌耐藥基因的分布特征和傳播機(jī)制.pdf

1、隨著抗菌藥物在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的廣泛使用，水產(chǎn)養(yǎng)殖源細(xì)菌的耐藥性逐漸變強(qiáng)，耐藥多樣性也漸漸增加，進(jìn)而促使動(dòng)物細(xì)菌性疾病的控制效果變差。氣單胞菌是主要的水產(chǎn)動(dòng)物致病菌之一，容易引起敗血癥、癤瘡和潰瘍等出血性疾病?？咕幬锏氖褂茫钦T導(dǎo)氣單胞菌耐藥性的主要因素。本文以水產(chǎn)養(yǎng)殖源氣單胞菌為研究對(duì)象，對(duì)其耐藥性、耐藥基因的分布特征及傳播機(jī)制進(jìn)行研究分析。
　　本研究中，49株氣單胞菌對(duì)8類17種抗菌藥物的藥敏結(jié)果顯示，對(duì)AMX的耐藥率高達(dá)100

2、％，對(duì)SMZ、TMP、SXT和RIF的耐藥率介于60％～90％之間，而對(duì)CTX、NEO、DOX以及喹諾酮類的ENR、NOR和OFL的耐藥率均低于15％;在所有菌株中，41株菌株對(duì)3類及以上的抗菌藥物具有抗性，24株菌株對(duì)9種及以上抗菌藥物具有抗性。
　　最小抑菌濃度(MIC)檢測結(jié)果顯示，TMP和SMZ的MIC50值最高(2048μg/mL)，其余按MIC50值高低依次為STR(64μg/mL)、CHL(32μg/mL)、NEO(

3、16μg/mL)、TET(16μg/mL)、FFL(16μg/mL)、DOX(4μg/mL)、ENR(1μg/mL)。最小殺菌濃度(MBC)檢測結(jié)果顯示，TET、TMP、SMZ ENR和NEO的MBC50與MIC50相等，CHL、STR和DOX的MBC50（64、256、和8μg/mL）則高于MIC50。抑菌圈直徑與MIC值的相關(guān)性研究發(fā)現(xiàn)，兩者之間均呈對(duì)數(shù)或指數(shù)負(fù)相關(guān)。
　　25種耐藥基因的PCR檢測結(jié)果顯示，基因組中，blaT

4、EM的檢出率最高(83.7％);其次是sul1和aadA，檢出率分別是69.4％和61.2％;再者是arr2/3、aphA1、tetC、sul2、dfrA5和floR，檢出率均高于40％。質(zhì)粒中，sul1的檢出率最高，為51％;其次是aphA1與aadA，分別為40.8％和38.8％; blaTEM、tetB、qnrB、qnrS、dfrA7、cat1和cmlA均未檢出，其余耐藥基因檢出率均在35％以下。
　　5類可移動(dòng)元件的PCR

5、檢測結(jié)果顯示，在基因組中，intI1檢出率最高(65.3％);其次是IS26、ISCR2和tnpU,分別是63.3％、57.1％和51％;其余均低于50％。質(zhì)粒中，intI1檢出率依舊最高，為57.1％;其次是IS26、ISCR2和merA，檢出率介于20％～35％之間;其余均低于15％。在1型整合子的可變區(qū)中，共發(fā)現(xiàn)13種基因盒排列，dfrA12-orfF-aadA2比例最高。ISCR2的可變區(qū)主要為兩種:ISCR2+glmM+sul

6、2（10株）和ISCR2-like+ str+strA+ sul2（2株）。
　　本研究中共獲得16株大腸桿菌轉(zhuǎn)化子、21株氣單胞菌轉(zhuǎn)化子和4株大腸桿菌接合子。轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，耐藥基因aadA、aphA1、sul2、tetA和floR較易通過轉(zhuǎn)化的方式傳遞給大腸桿菌，其中tetA基因陽性轉(zhuǎn)化子均表達(dá)四環(huán)素抗性;維氏氣單胞菌轉(zhuǎn)化子新增表型以RIF抗性為多，嗜水氣單胞菌轉(zhuǎn)化子多新增STR、KAN和CHL抗性，結(jié)果表明這4種藥物抗性較