我院耐亞胺培南銅綠假單胞菌臨床耐藥分布特點及機制研究.pdf

1、目的: 銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)是臨床上常見的條件致病菌，其臨床感染率已躍居病原菌的首位。隨著抗生素的廣泛應(yīng)用，銅綠假單胞菌對亞胺培南等碳青霉烯類抗生素耐藥已成為臨床治療中的難題。本論文對臨床分離的銅綠假單胞菌分別進行亞胺培南等14種抗生素的耐藥性試驗并對不同科室耐藥情況進行比較，旨為臨床合理使用抗生素提供科學(xué)依據(jù)。另外，為了了解銅綠假單胞菌對亞胺培南的耐藥機制，本論文從金屬β內(nèi)酰胺酶的

2、產(chǎn)生、外排泵過度表達和外膜蛋白OprD2缺失及低表達等方面分別進行了研究。 方法: 1.對我院2005年1月-2007年6月銅綠假單胞菌感染的住院患者進行調(diào)查，統(tǒng)計銅綠假單胞菌對亞胺培南等14種抗生素的耐藥性試驗并對不同科室耐藥情況。 2.對溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院2005年1月-2007年6月從臨床分離的150株非重復(fù)的銅綠假單胞菌用美國德靈公司的全自動微生物鑒定和藥敏分析儀對亞胺培南(IMP)等14種常用抗生素

3、的最低抑菌濃度(MIC)進行檢測；選出對亞胺培南耐藥的銅綠假單胞菌64株做為受試株，采用EDTA雙紙片協(xié)同法對其進行金屬β內(nèi)酰胺酶的抑制實驗，測定金屬β內(nèi)酰胺酶的產(chǎn)生，同時用PCR方法檢測金屬β內(nèi)酰胺酶的基因表達；用主動外排泵抑制劑氰氯苯蹤(CCCP)對其進行主動外排表型陽性菌的篩選并PCR擴增檢測；用PCR方法檢測外膜蛋白OprD2缺失。 結(jié)果: 1.2005年1月-2007年6月從臨床送檢標(biāo)本中共分離銅綠假單胞菌15

4、0株，其中對亞胺培南耐藥的64株，占42.6％(64/150)。 2.64株耐亞胺培南銅綠假單胞菌中，痰標(biāo)本占絕大部分，占85.9％(55/64)。64株耐亞胺培南銅綠假單胞菌感染病例病區(qū)分布，以ICU病區(qū)占首位，呼吸科其次，然后是神經(jīng)內(nèi)科和神經(jīng)外科病區(qū)，以上四個病區(qū)總共約占80.4％。 3.經(jīng)表型篩選試驗16株為產(chǎn)MBL陽性，占試驗菌株的14.06％(9/64)。以16株MBL陽性株P(guān)CR擴增：發(fā)現(xiàn)4株攜帶VIM基因和

5、3株攜帶IMP基因；其他為陰性結(jié)果。 4.在64株耐亞胺培南PA菌株中有17株細菌在加入CCCP值后，MIC值下降了2個梯度或者兩個梯度以上。上述17株主動外排表型陽性菌中5株(7.81％)同時檢測出OprM、MexB基因；有9株(14.06％)僅擴增出OprM基因而沒有MexB基因；有3株(4.69％)未擴增出外排基因。表型檢測結(jié)果表明應(yīng)用外排泵抑制劑方法篩選主動外排泵與基因擴增結(jié)果符合率為82.35％(14/17)，比較可靠

6、。 5.將64株耐亞胺培南的銅綠假單胞菌PCR擴增OprD2基因，共11株細菌未能得到產(chǎn)物，占17.19％(11/64)，說明該11株菌發(fā)生了孔道蛋白缺失。 結(jié)論: 1.從本院調(diào)查結(jié)果中分析，銅綠假單胞菌對亞胺培南耐藥率達42.4％，其感染部位大部分在呼吸道，主要在ICU病區(qū)、呼吸內(nèi)科、神經(jīng)內(nèi)科及神經(jīng)外科等病區(qū)內(nèi)流行。 2.體外藥敏試驗顯示，氨基糖苷類抗菌藥物對耐亞胺培南銅綠假單胞菌耐藥率較低，其次為酶抑