銅綠假單胞菌對(duì)亞胺培南的耐藥機(jī)制及相關(guān)整合子的研究.pdf

1、【研究背景】： 銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa，Pae)屬于非發(fā)酵革蘭陰性菌，是人體最常見的條件致病菌之一，它廣泛分布于自然界，正常人的皮膚、腸道和呼吸道中，當(dāng)機(jī)體免疫力低下時(shí)可引起人體多系統(tǒng)、多臟器或多部位感染，在醫(yī)院獲得性感染中占有非常重要的地位。近年來，由于其分離率高、治療困難并時(shí)有爆發(fā)流行而受到高度重視。 亞胺培南是迄今為止開發(fā)的抗菌藥物中抗菌譜最廣、抗菌作用最強(qiáng)的一類碳青霉烯類抗生素

2、，作為治療銅綠假單胞菌所引起嚴(yán)重感染的最后一道防線。然而，隨著碳青霉烯類抗生素的大量臨床應(yīng)用，細(xì)菌對(duì)其耐藥的情況也逐年增多，亞胺培南耐藥銅綠假單胞菌在世界范圍內(nèi)均有報(bào)道，常常導(dǎo)致在臨床上無藥可治的地步。其中產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶(Metallo-β-Lactamases，MBL)是銅綠假單胞菌對(duì)亞胺培南耐藥的重要機(jī)制之一。 金屬β-內(nèi)酰胺酶能高效水解除單環(huán)β-內(nèi)酰胺類以外的所有β-內(nèi)酰胺類抗生素，介導(dǎo)產(chǎn)MBL菌株對(duì)青霉素、頭孢菌素、

3、碳青霉烯等多種抗菌藥物形成耐藥。迄今為止，已有5類金屬β-內(nèi)酰胺酶被相繼報(bào)道，它們分別是IMP家族、VIM家族、SPM-1、GIM-1和SIM-1。 大多數(shù)金屬β-內(nèi)酰胺酶的編碼基因位于整合子上。整合子是細(xì)菌中的可移動(dòng)遺傳物質(zhì)，攜帶位點(diǎn)特異性重組系統(tǒng)組分，可將多種耐藥基因盒(gene cassette)整合在一起。細(xì)菌通過整合子系統(tǒng)，在整合酶的作用下，可以捕獲外來的耐藥基因，并在位于整合子上游的啟動(dòng)子的作用下得到表達(dá)，從而具有耐

4、藥及多重耐藥性?，F(xiàn)有的文獻(xiàn)資料顯示，亞胺培南耐藥銅綠假單胞菌所引起的爆發(fā)性流行在全球范圍內(nèi)均有報(bào)道。在亞洲地區(qū)，特別是日本和臺(tái)灣，亞胺培南耐藥銅綠假單胞菌引起的院內(nèi)感染也屢見報(bào)道。 【目的】： 1.了解銅綠假單胞菌對(duì)常見抗生素的耐藥現(xiàn)狀及其耐藥譜特征，以指導(dǎo)臨床合理選用抗生素； 2.明確金屬β-內(nèi)酰胺酶在廣州地區(qū)銅綠假單胞菌中的流行狀況及其流行亞型，完善廣州地區(qū)金屬β-內(nèi)酰胺酶的分子流行病學(xué)資料； 3.研

5、究整合子在廣州地區(qū)銅綠假單胞菌中的分布情況及其所攜帶的耐藥基因盒，探討整合子與細(xì)菌多重耐藥機(jī)制之間的相關(guān)性。 【方法】： 1.采用VITEK-32型全自動(dòng)細(xì)菌分析系統(tǒng)對(duì)臨床收集的銅綠假單胞菌進(jìn)行重新鑒定； 2.依據(jù)美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSL原名NCCLS)2007年版推薦的紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，并用瓊脂稀釋法檢測(cè)銅綠假單胞菌對(duì)常見抗生素的最低抑菌濃度(minimal inhibitory concen

6、trations，MIC)； 3.采用雙紙片協(xié)同和雙紙片增效兩種方法篩選金屬β-內(nèi)酰胺酶表型陽性菌株； 4.設(shè)計(jì)合成針對(duì)blaIMP、blaViM、blaGIM-1、blaSPM-1、blaSIM-1和整合子的引物序列，采用PCR技術(shù)對(duì)產(chǎn)MBL銅綠假單胞菌進(jìn)行特異性擴(kuò)增，并對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行DNA測(cè)序分析。 【結(jié)果】： 1.細(xì)菌的臨床資料顯示，499株銅綠假單胞菌主要分離自痰標(biāo)本(67.9％)，病房分布則集

7、中在ICU(40.8％)和呼吸科(35.0％)；藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，499株銅綠假單胞菌對(duì)下列抗生素的平均耐藥率分別為：亞胺培南(32.8％)、美羅培南(21.4％)、頭孢他啶(7.1％)、頭孢吡肟(8.3％)、慶大霉素(42.0％)、阿米卡星(36.6％)、環(huán)丙沙星(7.6％)、左旋氧氟沙星(8.1％)、氨曲南(20.5％)、哌拉西林(8.8％)、哌拉西林／三唑巴坦(83％)，其中，2003年～2007年5年期間銅綠假單胞菌對(duì)亞胺培南的

8、耐藥率分別是27.7％、25.0％、31.6％、35.2％和34.3％： 2.164株亞胺培南耐藥銅綠假單胞菌對(duì)抗生素的耐藥譜顯示，多重耐藥菌株占絕大多數(shù)(68.9％)，泛耐藥菌株占28.6％，且對(duì)每種抗生素的耐藥率均在50％以上； 3.22株金屬β-內(nèi)酰胺酶表型陽性的銅綠假單胞菌均為多重耐藥菌株，其中8株為泛耐藥菌株，標(biāo)本類型以痰標(biāo)本為主；基因檢測(cè)結(jié)果顯示，其中11株產(chǎn)IMP-9型MBL，5株產(chǎn)VIM-2型MBL，4株

9、產(chǎn)生一種新的IMP家族亞型，命名為IMP-25，共有16株銅綠假單胞菌攜帶I類整合子，另有2株金屬β-內(nèi)酰胺酶和整合子的PCR檢測(cè)結(jié)果均為陰性。 【結(jié)論】： 1.2003年～2007年廣州地區(qū)銅綠假單胞菌整體耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重，對(duì)亞胺培南的耐藥率一直維持在較高水平； 2.廣州地區(qū)銅綠假單胞中金屬β-內(nèi)酰胺酶的基因型已經(jīng)出現(xiàn)多型化的特征，同時(shí)存在IMP型和VIM型金屬β-內(nèi)酰胺酶的流行； 3.發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新的會(huì)屬β