銅綠假單胞菌耐藥性檢測(cè)及亞胺培南耐藥株耐藥機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院銅綠假單胞菌（PA）對(duì)常用抗菌藥物的耐藥狀況，以及PA對(duì)亞胺培南耐藥的分子生物學(xué)機(jī)制，為臨床合理用藥，減少耐藥的發(fā)生提供依據(jù)。 方法：收集本院2006年9月至2007年8月臨床各科送檢的住院患者標(biāo)本，進(jìn)行常規(guī)分離培養(yǎng)，檢測(cè)出PA，用瓊脂倍比稀釋法測(cè)定亞胺培南耐藥或中介的PA對(duì)11種常用抗菌藥物的最低抑菌濃度MICs，了解我院PA的耐藥情況，并篩選出亞胺培南的耐藥菌株。選擇以腸桿菌科基因重復(fù)序

2、列為引物的聚合酶鏈反應(yīng)（ERIC-PCR）方法對(duì)耐亞胺培南PA的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，進(jìn)行分子生物學(xué)分型，了解我院耐亞胺培南PA的感染是否為同一起源的菌株引起；選取金屬酶流行基因型別（IMP－1型和VIM－4型基因）對(duì)耐亞胺培南的PA的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并與標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)酶菌株比對(duì)，確定本院金屬酶流行的主要基因型；提取亞胺培南耐藥菌株和敏感菌株的外膜蛋白，采用SDS－PAGE法分離，測(cè)定外膜蛋白OprD2含量，并比較耐藥菌株及敏感菌株的外膜

3、蛋白OprD2含量。 結(jié)果： 1.耐藥情況：2006年9月至2007年8月本院共分離到PA 161株，應(yīng)用瓊脂倍比稀釋法檢出耐亞胺培南的PA 22株，占同期全部檢出銅綠假單胞菌161株的13.7％。22株耐亞胺培南的PA對(duì)其他10種受試抗菌藥物的敏感性，以哌拉西林/他唑巴坦最為敏感，敏感率為72.7％，其次為哌拉西林和頭孢哌酮，敏感率分別為68.2％和63.7％。亞胺培南耐藥的PA對(duì)美羅培南的敏感率為50％。22株耐亞胺

4、培南的PA對(duì)環(huán)丙沙星耐藥率最高，為68.2％。另外，發(fā)現(xiàn)3株對(duì)11種受試抗菌藥物全部耐藥的多重耐藥株。22株耐亞胺培南的PA主要分離自呼吸道標(biāo)本。 2.耐亞胺培南銅綠假單胞菌的分子生物學(xué)研究： （1）ERIC-PCR方法對(duì)耐亞胺培南的PA進(jìn)行分子生物學(xué)分型，22株亞胺培南耐藥株分為18型，其中有4個(gè)型別含2株耐藥菌，提示我院未曾出現(xiàn)過PA的暴發(fā)流行； （2）22株亞胺培南耐藥株中，發(fā)現(xiàn)1株產(chǎn)IMP-1型基因的耐藥菌株

5、，但未擴(kuò)增出VIM-4型金屬酶基因； （3）SDS－PAGE結(jié)果分析，與亞胺培南敏感菌株相比，耐藥菌株的外膜蛋白OprD2缺失或條帶較淡，進(jìn)一步半定量分析發(fā)現(xiàn)耐藥菌株外膜蛋白OprD2含量明顯低于敏感菌株，差別具有顯著性意義。 結(jié)論： 1.上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院PA對(duì)亞胺培南的耐藥率為13.7％，PA主要分離自呼吸道標(biāo)本。 2.（1）22株耐亞胺培南的PA分為18型，其中有4個(gè)型別含2株耐藥菌，提示我