銅綠假單胞菌耐藥性臨床與基礎(chǔ)的初步研究.pdf

1、目的：
　　銅綠假單孢菌(Pseudomonas aeruginosa, PA)感染在早產(chǎn)兒中的發(fā)病率及死亡率較高，且PA對多種抗菌藥物耐藥，給臨床治療帶來極大難題。研究發(fā)現(xiàn)，PA對亞胺培南的耐藥機制主要包括外膜蛋白OprD2表達缺失以及產(chǎn)生金屬β-內(nèi)酶胺酶（以IMP、VIM多見）兩方面。本研究擬分析我院早產(chǎn)兒PA感染的臨床特點及其耐藥情況。并探討人臍帶間充質(zhì)干細胞（human umbilical cord mesenchymal

2、 stem cells, hUCMSCs）體外對耐亞胺培南銅綠假單胞菌（imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa，IRPA）耐藥性形成的影響及對OprD2、VIM-2、IMP-9、Inti1基因影響。
　　對象與方法：
　　臨床研究：選取我院2011年9月～2013年8月NICU送檢標本中PA培養(yǎng)陽性的115例住院患兒為研究對象，剔除足月兒病例、重復(fù)病例及定植者后共有53例入選，回顧

3、性分析53例PA感染早產(chǎn)患兒的臨床表現(xiàn)及耐藥情況。
　　基礎(chǔ)研究：實驗組為 hUCMSCs組，對照組為細胞對照組（人肺成纖維細胞， normal human lung fibroblast, NHLF）和空白對照組。在次抑菌濃度肉湯誘導(dǎo)PA耐藥傳導(dǎo)過程中，hUCMSCs組和NHLF組分別加入其與PA共培育的上清液，空白對照組加入細胞培養(yǎng)液，觀察三組誘導(dǎo)耐藥所需代數(shù)以及抑菌圈的大小。在誘導(dǎo)耐藥前后分別采用K-B法及Real-time

4、 PCR法測定PA對常見抗菌藥物的敏感性及OprD2、VIM-2、IMP-9、Inti1基因的表達量。
　　結(jié)果：
　　藥敏結(jié)果顯示，53株分離自早產(chǎn)兒臨床標本的PA株對常見抗菌藥物的耐藥率較高，對曾經(jīng)被認為治療多重耐藥性PA感染首選藥物的碳青酶烯類抗生素如亞胺培南、美羅培南的耐藥率高達50.94％和49.06%。而對于臨床常用于治療新生兒感染的敏感性較高的抗生素為哌拉西林/他唑巴坦（92.45%）、頭孢吡肟（92.45%）

5、、哌拉西林（90.57%）和頭孢他啶（88.68%）。
　　經(jīng)次抑菌濃度的亞胺培南誘導(dǎo)后，hUCMSCs組耐藥性的出現(xiàn)較NHLF組及空白對照組延遲，NHLF組和空白對照組于誘導(dǎo)的第17代出現(xiàn)亞胺培南耐藥，而hUCMSCs組于第19代出現(xiàn)耐藥性。Real-time PCR結(jié)果顯示，誘導(dǎo)耐藥后PA中OprD2表達量較誘導(dǎo)前出現(xiàn)減少或消失。其中hUCMSCs組OprD2的表達量減少至誘導(dǎo)耐藥前的10.96%，而NHLF及空白對照組Opr

6、D2無表達，即誘導(dǎo)后出現(xiàn)OprD2基因缺失。在誘導(dǎo)耐藥前后的PA株中均未檢測到VIM-2、IMP-9、Inti1基因的表達。
　　結(jié)論：
　　1.銅綠假單胞菌對碳青酶烯類藥物的耐藥率較高。
　　2.人臍帶間充質(zhì)干細胞具有延遲PA耐藥性形成的作用。
　　3.外膜蛋白OprD2表達量減少或缺失是引起PA對亞胺培南耐藥的原因。
　　4.人臍帶間充質(zhì)干細胞延遲PA耐藥性出現(xiàn)的機制可能是通過分泌抗菌肽LL-37和人β