銅綠假單胞菌多藥耐藥性分子流行病學(xué)研究.pdf

1、背景和目的：銅綠假單胞菌是醫(yī)院內(nèi)感染的重要病原體，位于醫(yī)院呼吸道感染的首位，其多藥耐藥性已經(jīng)成為臨床治療的棘手問題。鑒于當(dāng)前國內(nèi)外多數(shù)研究僅限于對(duì)銅綠假單胞菌單一的臨床耐藥譜、耐藥基因進(jìn)行探討，而對(duì)銅綠假單胞菌多藥耐藥的產(chǎn)生及其相關(guān)的危險(xiǎn)因素的研究還非常匱乏，本地區(qū)未見報(bào)道。因此本研究旨在調(diào)查本地臨床多藥耐藥銅綠假單胞菌感染現(xiàn)狀及其危險(xiǎn)因素，并從分子水平探討其感染的同源性和多藥耐藥的可能機(jī)制，從而為有效地預(yù)防和控制多藥耐藥銅綠假單胞菌感

2、染提供科學(xué)的參考依據(jù)。
　　 方法：連續(xù)收集2008年7月到2009年7月廣州某三甲醫(yī)院各科室感染的全部銅綠假單胞菌，剔除重復(fù)的病人菌株，根據(jù)菌株標(biāo)本號(hào)和病案號(hào)，使用統(tǒng)一自制調(diào)查表，對(duì)患者病案資料進(jìn)行數(shù)據(jù)收集，摘錄的內(nèi)容包括患者基本情況、合并疾病、住院情況、抗生素使用、侵襲性操作、混合感染其他病原體。采用Kirby-Bauer紙片擴(kuò)散法對(duì)2009年CLSI規(guī)定的A組和B組共13種七大類藥物行藥敏實(shí)驗(yàn)，分析銅綠假單胞菌的耐藥情況，

3、并篩選MDRPA(對(duì)3類或以上抗生素耐藥銅綠假單胞菌)和NMDRPA，采用橫斷面研究方法分析MDRPA感染現(xiàn)狀，通過單因素和多因素非條件Logistic回歸分析MDRPA感染的危險(xiǎn)因素。
　　 采用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)的基因分型方法對(duì)銅綠假單胞菌進(jìn)行基因分型和同源性分析，并結(jié)合流行病學(xué)資料，鑒定散發(fā)及流行菌株，分析病人交叉感染狀況，追蹤傳染源，了解傳播途徑。
　　 采用頭孢硝噻吩顯色法篩查銅綠假單胞菌產(chǎn)β-內(nèi)

4、酰胺酶的情況，用改良三維試驗(yàn)檢測AmpC酶和ESBLs酶，并對(duì)ESBLs酶PER基因和金屬β-內(nèi)酰胺酶IMP基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增檢測，初步探討銅綠假單胞菌耐藥的分子機(jī)制。
　　 結(jié)果：2008年7月到2009年7月在廣州某三甲醫(yī)院共收集不重復(fù)不同患者190株銅綠假單胞菌。其中67例MDRPA，123例NMDRPA，多藥耐藥率為35.3[％]。MDRPA感染男性占64.2[％](43/67)，年齡中位數(shù)是73.7歲。ICU、呼吸內(nèi)科

5、、神經(jīng)內(nèi)科最多，分別占19.4[％]、19.4[％]、17.9[％]。主要是呼吸道感染77.6[％]，其次是泌尿系統(tǒng)感染11.9[％]和外傷口感染4.5[％]。銅綠假單胞菌對(duì)抗生素敏感性最低三位是β-內(nèi)酰胺酶類的ATM 52.6[％]、TIC 63.7[％]、CAZ 69.5[％]，IMP、TZP、AMK、MEN的敏感性較高，達(dá)85[％]以上。
　　 銅綠假單胞菌多藥耐藥危險(xiǎn)因素的單因素分析結(jié)果顯示：合并高血壓、住院時(shí)間、入院病

6、情、入住ICU、使用β-內(nèi)酰胺酶抑制復(fù)合劑、使用碳青霉烯類抗生素、使用喹諾酮類抗生素、使用抗生素天數(shù)、使用抗生素≥3種、混合感染肺炎克雷伯氏菌、混合感染嗜麥芽窄食單胞菌、混合感染真菌、合并感染病原體種類數(shù)≥4種、吸痰、吸氧、氣管插管、深靜脈插管、導(dǎo)尿管插管、鼻胃飼管插管等19個(gè)因素與銅綠假單胞菌多藥耐藥有關(guān)。經(jīng)過非條件Logistic回歸多因素分析得出，入院病情重(OR=2.061，95[％]CI 1.116-3.806)、使用β-內(nèi)酰

7、胺酶抑制復(fù)合劑(OR=2.244，95[％]CI 1.113-3.525)、深靜脈插管 (OR=2.830，95[％]CI 1.375-5.822)是銅綠假單胞菌多藥耐藥的危險(xiǎn)因素。
　　 通過RAPD基因分型和同源性分析，銅綠假單胞菌株之間的同源系數(shù)在20[％]-100[％]之間，大部分同源系數(shù)小于80[％]。銅綠假單胞菌感染方式以內(nèi)源性感染為主，交叉感染少。190株銅綠假單胞菌分174種基因型，其中 8種基因型A、B、C、D

8、、E、F、G、H都為兩個(gè)病人同源菌株共有。A型的兩株同源菌株都在ICU檢出，兩患者可能在ICU發(fā)生交叉感染，B、C、D、E、F、G、H型同源菌株在不同科室檢出。
　　 頭孢硝噻吩顯色法檢測銅綠假單胞菌產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶率為92.6[％]，改良的三維實(shí)驗(yàn)法檢測產(chǎn)AmpC酶12.6[％]、ESBLs酶3.2[％]、SSBL0.5[％]、其他β-內(nèi)胺酶1.1[％]，總產(chǎn)酶率為17.4[％]。各種產(chǎn)酶率和總產(chǎn)酶在MDRPA組和NMDRPA組

9、差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。70株擴(kuò)增出PER基因，占36.8[％]；28株檢出IMP基因，占14.7[％]。但兩者在MDRPA和NMDRPA中檢出率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：該院銅綠假單胞菌多藥耐藥率已達(dá)到了國內(nèi)外水平，其形勢嚴(yán)峻，應(yīng)引起高度重視。銅綠假單胞菌感染方式主要以內(nèi)源性感染為主，交叉感染少。入院病情重、使用β-內(nèi)酰胺酶抑制復(fù)合劑、深靜脈插管是銅綠假單胞菌多藥耐藥的危險(xiǎn)因素。銅綠假單胞菌對(duì)β-內(nèi)酰胺酶類抗菌藥物(除亞胺培南