銅綠假單胞菌耐碳青霉烯類機(jī)制研究及分子流行病學(xué)調(diào)查.pdf

1、目的：研究銅綠假單胞菌對碳青霉烯類抗生素耐藥機(jī)制，同時(shí)利用重復(fù)序列聚合酶鏈反應(yīng)（rep-PCR）進(jìn)行分子流行病學(xué)調(diào)查。 方法：收集新華醫(yī)院在2004 年7 月~ 2005 年8 月臨床分離的耐亞胺培南和美羅培南銅綠假單胞菌共58 株，對碳青霉烯類抗生素耐藥機(jī)制進(jìn)行研究：1）在M-H 瓊脂平板中加入針對不同酶及外排泵抑制劑，進(jìn)行K-B 法藥敏試驗(yàn)；2）用改良三相水解試驗(yàn)檢測β-內(nèi)酰胺酶； 3）用等電聚焦電泳進(jìn)行酶的分析；4）用聚合

2、酶鏈反應(yīng)( PCR)檢測金屬酶基因（IMP、VIM）以及外膜膜孔蛋白基因（OprD2）；5）采用重復(fù)序列聚合酶鏈反應(yīng)（rep-PCR）進(jìn)行基因分型。 結(jié)果：58 株耐碳青霉烯類銅綠假單胞菌中，有52 株持續(xù)高產(chǎn)AmpC 酶合并主動(dòng)外排系統(tǒng)的過度表達(dá)，其中15 株同時(shí)伴有外膜膜孔蛋白OprD2 缺失；1 株既持續(xù)高產(chǎn)AmpC 酶又有ESBLs 且合并過度表達(dá)主動(dòng)外排；在5 株既不產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶又無過度表達(dá)主動(dòng)外排的細(xì)菌中，有1

3、株OprD2 基因缺失；58 株均未檢測到金屬酶。對58 株菌株進(jìn)行重復(fù)序列聚合酶鏈反應(yīng)（rep-PCR），經(jīng)電泳后得到3-10 條條帶，分成16 個(gè)基因型。從重癥監(jiān)護(hù)室（ICU）病人分離所得的菌株，主要為Ⅱ型和Ⅲ型，分別占71.79％(28/39)和17.95％（7/39），從急診科、高干病區(qū)和呼吸科病人標(biāo)本中分離所得的菌株，除有各自相對獨(dú)立的基因型外，同時(shí)還有與ICU 菌株重疊的基因型存在。其余病區(qū)病人所分離的耐碳青霉烯類銅綠假單胞