耐碳青霉烯類不動(dòng)桿菌的耐藥機(jī)制與分子流行病學(xué)研究.pdf

1、目的:
　　1.了解福州市臨床分離的耐碳青霉烯類不動(dòng)桿菌耐藥性的產(chǎn)生與B類和D類碳青霉烯酶之間的關(guān)系。
　　2.探討A類碳青霉烯酶、外膜孔蛋白和外排泵在攜帶NDM-1型基因的耐碳青霉烯類不動(dòng)桿菌中的作用。
　　3.研究NDM-1、NDM-6及NDM-9型酶對(duì)亞胺培南的水解能力。
　　4.研究福州市臨床分離的耐碳青霉烯類不動(dòng)桿菌的分子流行病學(xué)特點(diǎn)。方法:
　　1.收集2010年9月~2014年8月福州市臨床分

2、離的391株非重復(fù)的耐碳青霉烯類不動(dòng)桿菌，采用VITEK-2 compact全自動(dòng)微生物分析儀進(jìn)行菌種鑒定和藥敏試驗(yàn)，然后通過K-B法驗(yàn)證菌株對(duì)亞胺培南的耐藥性。通過42℃生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)、OXA-51-like基因檢測(cè)和rpoB基因序列分析進(jìn)行菌種鑒定。PCR法檢測(cè)B類和D類碳青霉烯酶基因。
　　2.對(duì)攜帶有NDM-1型基因的不動(dòng)桿菌，運(yùn)用PCR法篩查A類碳青霉烯酶基因、外膜孔蛋白基因和外排泵基因。構(gòu)建含NDM-1、NDM-6及NDM-

3、9型酶的pCR2.1載體，導(dǎo)入TOP10感受態(tài)細(xì)胞中，利用瓊脂稀釋法測(cè)定不同類型重組菌對(duì)亞胺培南的最小抑菌濃度值。
　　3.利用DiversiLab細(xì)菌DNA指紋圖譜分析系統(tǒng)對(duì)福州市臨床分離的50株耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌、5株 Pittii不動(dòng)桿菌和3株 Nosocomialis不動(dòng)桿菌進(jìn)行基因分型。在50株耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌中，39株來自福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院，9株來自福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，2株來自南京軍區(qū)福州總醫(yī)

4、院。5株P(guān)ittii不動(dòng)桿菌和3株Nosocomialis不動(dòng)桿菌均來自福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院。
　　結(jié)果：
　　1.①391株耐碳青霉烯類不動(dòng)桿菌中，382株為鮑曼不動(dòng)桿菌，5株為Pittii不動(dòng)桿菌，4株為Nosocomialis不動(dòng)桿菌。②在382株耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌中，OXA-23-like基因陽(yáng)性率為93.46％（357株），OXA-24-like基因陽(yáng)性率1.05%（4株），OXA-58-like基因陽(yáng)性

5、率0.52%（2株），均未檢出OXA-143-like基因；2株檢出NDM-1型基因。③在5株P(guān)ittii不動(dòng)桿菌中，2株檢出OXA-58-like基因，5株均未檢出OXA-23-like、OXA-24-like及OXA-143-like基因；5株均檢出NDM-1型基因。④在4株Nosocomialis不動(dòng)桿菌中，4株均未檢出OXA-23-like、OXA-24-like、OXA-58-like及OXA-143-like基因；3株檢出N

6、DM-1型基因。⑤該391株耐碳青霉烯類不動(dòng)桿菌的其余金屬β-內(nèi)酰胺酶基因篩查結(jié)果均為陰性。
　　2.①在2株攜帶 NDM-1型基因的鮑曼不動(dòng)桿菌中，1株檢出 OXA-23-like基因，均未檢出其它碳青霉烯酶基因；2株均檢出外膜孔蛋白carO基因，1株檢出外膜孔蛋白o(hù)prD基因；2株均檢出adeB、adeI、adeJ及adeK基因。②在5株攜帶NDM-1型基因的Pittii不動(dòng)桿菌中，2株檢出OXA-58-like基因，均未檢出

7、其它碳青霉烯酶基因；5株均檢出外膜孔蛋白 oprD基因，5株均未檢出外膜孔蛋白carO基因；5株均檢出外排泵adeI、adeK基因，4株檢出adeJ基因，1株檢出adeB基因。③在3株攜帶NDM-1型基因Nosocomialis不動(dòng)桿菌中，均未檢出其它碳青霉烯酶基因；3株均檢出外膜孔蛋白 carO、oprD基因；3株均檢出外排泵adeB、adeI、adeJ及adeK基因。④以上10株攜帶NDM-1型基因的不動(dòng)桿菌，均未檢出外排泵調(diào)節(jié)基因

8、adeS。⑤表達(dá)NDM-1、NDM-6及NDM-9酶的重組菌，對(duì)亞胺培南的MIC值分別為32、128和64μg/ml。
　　3.福州市50株耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌可分為A~G七個(gè)型別，其中A、B、E和G型各1株，C型4株，D型7株，F(xiàn)型35株。5株P(guān)ittii不動(dòng)桿菌和3株Nosocomialis不動(dòng)桿菌可分為A和B兩型。
　　結(jié)論：
　　1.福州市臨床分離的耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯類抗生素的耐藥機(jī)制主要與

9、產(chǎn)OXA-23-like碳青霉烯酶相關(guān)。
　　2.第一次在耐碳青霉烯類 Pittii不動(dòng)桿菌中同時(shí)檢出 NDM-1型基因與OXA-58-like基因。
　　3.第一次在福建省內(nèi)發(fā)現(xiàn)攜帶OXA-24-like、OXA-58-like和NDM-1型基因的耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌。
　　4. NDM-1型基因陽(yáng)性的Pittii不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯類抗生素耐藥主要可能是由外膜孔蛋白 CarO缺失，AdeIJK外排泵及 NDM-1

10、酶共同作用的結(jié)果。而NDM-1型基因陽(yáng)性的Nosocomialis不動(dòng)桿菌與鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯類抗生素耐藥可能主要與AdeIJK外排泵及和NDM-1酶有關(guān)。
　　5. NDM-1、NDM-6及NDM-9酶水解亞胺培南能力從強(qiáng)到弱依次為NDM-6、NDM-9和NDM-1酶。
　　6.福州市流行的耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌的基因型為 F型。在福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院燒傷ICU和綜合ICU流行的耐碳青霉烯類鮑曼不動(dòng)桿菌的基因型不