鮑曼不動(dòng)桿菌碳青霉烯酶檢測(cè)及分子流行病學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　 了解安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床分離鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)臨床常用抗生素的耐藥性和碳青霉烯酶產(chǎn)生情況，以及了解鮑曼不動(dòng)桿菌β-內(nèi)酰胺酶基因型，尤其是OXA型碳青霉烯酶基因的分布情況。指導(dǎo)臨床合理使用抗生素，減輕耐藥給臨床治療帶來(lái)的選擇性壓力；檢測(cè)耐碳青霉烯類藥物鮑曼不動(dòng)桿菌的同源性，分析耐藥株在醫(yī)院內(nèi)感染的分子流行病學(xué)特征，指導(dǎo)臨床有效控制耐藥株在醫(yī)院內(nèi)的傳播。
　　 材料與方法：
　　 收集安徽醫(yī)科大學(xué)第

2、一附屬醫(yī)院2006年10月至2008年09月臨床分離鮑曼不動(dòng)桿菌141株；采用瓊脂稀釋法測(cè)定141株鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)14種抗生素的最低抑菌濃度，改良Hodge試驗(yàn)對(duì)耐碳青霉烯類藥物鮑曼不動(dòng)桿菌產(chǎn)碳青霉烯酶（OXA酶）進(jìn)行表型檢測(cè)；PCR方法對(duì)141株鮑曼不動(dòng)桿菌β-內(nèi)酰胺酶基因進(jìn)行篩查，對(duì)碳青霉烯酶全編碼基因進(jìn)行克隆測(cè)序分析。采用轉(zhuǎn)移接合試驗(yàn)和質(zhì)粒DNA的檢測(cè)了解碳青霉烯酶基因是否具有可轉(zhuǎn)移性；ERIC-PCR分析攜帶D類碳青霉烯酶（OX

3、A）基因鮑曼不動(dòng)桿菌的同源性，脈沖場(chǎng)凝膠電泳（PFGE）分析2008年安徽醫(yī)科大學(xué)第一附院臨床分離耐碳青霉烯類藥物鮑曼不動(dòng)桿菌的同源性。
　　 結(jié)果：
　　 141株鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)哌拉西林的耐藥率為93.3％，頭孢曲松、頭孢他啶和頭孢吡肟分別為89.6％、87.3％和81.3％，頭孢哌酮/舒巴坦為44.0％，左氧氟沙星為88.1％，加替沙星為49.3％。亞胺培南和美羅培南分別為34.3％和41.0％。資料顯示鮑曼不動(dòng)桿菌

4、的耐藥現(xiàn)象較嚴(yán)重。碳青霉烯酶（OXA酶）表型檢測(cè)結(jié)果顯示60株耐碳青霉烯類藥物鮑曼不動(dòng)桿菌檢測(cè)出陽(yáng)性37株。
　　 141株鮑曼不動(dòng)桿菌β-內(nèi)酰胺酶基因篩查結(jié)果為：CTX-M-1-like陽(yáng)性2株，CTX-M-14-like陽(yáng)性5株，TEM陽(yáng)性79株，SHV 陽(yáng)性3株，blaOXA-23陽(yáng)性3株，ISAba1-blaOXA-23陽(yáng)性39株，blaOXA-58陽(yáng)性3株，blaOXA-66陽(yáng)性85株。碳青霉烯酶表型檢測(cè)陽(yáng)性的37株鮑

5、曼不動(dòng)桿菌基因檢測(cè)結(jié)果為：blaOXA-23陽(yáng)性31株，blaOXA-58陽(yáng)性2株，blaOXA-66陽(yáng)性4株。全編碼基因TA克隆測(cè)序結(jié)果分析顯示：blaOXA-23和 blaOXA-66未見(jiàn)突變，1株blaOXA-58發(fā)現(xiàn)突變，突變點(diǎn)位于第14位堿基處，A變?yōu)镚,相應(yīng)Phe變?yōu)镾er，其余兩株無(wú)突變。轉(zhuǎn)移接合試驗(yàn)結(jié)果為：42株blaOXA-23全部位于染色體上，1株blaOXA-58位于質(zhì)粒上，2株位于染色體。出現(xiàn)突變的blaOXA-

6、58位于質(zhì)粒上。
　　 ERIC-PCR結(jié)果顯示：攜帶OXA-23基因的42株鮑曼不動(dòng)桿菌分為6個(gè)型，分別用A、B、C、D、E、F表示，屬于同一型有34株，具有親緣關(guān)系的總共有38株，其余4株分別屬于其他兩個(gè)型，這兩個(gè)型之間也存在著親緣關(guān)系。3株blaOXA-58陽(yáng)性鮑曼不動(dòng)桿菌不具有同源性。PFGE分析結(jié)果顯示：2008年安徽醫(yī)科大學(xué)第一附院臨床分離的20株耐碳青霉烯類藥物鮑曼不動(dòng)桿菌分為5個(gè)型其中包括2個(gè)亞型，總共有12株屬

7、于同一型。
　　 結(jié)論：
　　 鮑曼不動(dòng)桿菌多藥耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重，對(duì)頭孢菌素類等多種抗生素呈高度耐藥，對(duì)碳青霉烯類藥物耐藥率亦較高呈逐年升高趨勢(shì)；產(chǎn)碳青霉烯酶（OXA酶）是鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯類耐藥的主要機(jī)制之一；鮑曼不動(dòng)桿菌具有較高的β-內(nèi)酰胺酶基因攜帶率，基因型分別以TEM、blaOXA-23和blaOXA-66為主，其中ISAba1是blaOXA-23的啟動(dòng)序列；基因型檢測(cè)證實(shí)本院臨床分離鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)碳青霉烯類耐藥