耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌碳青霉烯酶及整合子研究.pdf

1、目的：調(diào)查我院臨床分離的耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌對各類抗生素的耐藥性，了解碳青霉烯酶及整合子分布情況，分析耐藥菌株醫(yī)院內(nèi)感染的分子流行病學(xué)特征，指導(dǎo)臨床有效控制耐藥菌株在醫(yī)院內(nèi)的傳播。
　　 方法：收集2008年1月至2010年3月天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院臨床分離的非重復(fù)耐亞胺培南鮑曼不動桿菌103株，應(yīng)用Vitek-2compact系統(tǒng)進行藥敏試驗，采用改良Hodge試驗、改良三維試驗、EDTA協(xié)同試驗和2-巰基丙酸協(xié)同試驗初篩碳青

2、霉烯酶；多重PCR同時檢測OXA類碳青霉烯酶基因(blaOXA-23-like，blaOXA-24-like，blaOXA-51-like，blaOXA-58-like)、金屬酶基因(IMP-1，VIM-2)、Ⅰ類和Ⅱ類整合酶基因(intI1，intI2)；單一PCR檢測OXA類基因上游插入序列ISAbal，對整合酶基因陽性菌株再進行整合子可變區(qū)的擴增，并測序分析整合子可變區(qū)攜帶的耐藥基因盒；應(yīng)用隨機擴增多態(tài)性DNA(RAPD)技術(shù)對所

3、有菌株進行分子流行病學(xué)研究，確定耐藥菌株間的親緣關(guān)系。
　　 結(jié)果：103株耐亞胺培南鮑曼不動桿菌對所測試的15種抗生素耐藥現(xiàn)象十分嚴(yán)重，所有菌株同時對美羅培南耐藥，菌株對頭孢哌酮/舒巴坦的敏感率最高(35.9％)，其次為阿米卡星(29.1％)，對其余抗菌藥物的敏感率均低于21.0％；改良Hodge試驗碳青霉烯酶陽性75株(72.8％)，改良三維試驗檢出產(chǎn)酶菌株80株(77.7％)，美羅培南與EDTA協(xié)同共檢出金屬酶表型陽性菌株

4、47株(45.6％)，頭孢他啶與EDTA協(xié)同發(fā)現(xiàn)金屬酶表型陽性46株(44.7％)，所有菌株使用頭孢他啶與2-巰基丙酸協(xié)同未檢測到金屬酶陽性菌株；多重PCR結(jié)果表明，所有菌株均攜帶blaOXA-51-like基因，陽性檢出率100％，blaOXA-23-like陽性89株，陽性檢出率86.4％，本研究還發(fā)現(xiàn)2株菌攜帶blaOXA-24-like基因，檢出率1.9％，Ⅰ類整合酶基因(intI1)陽性92株，陽性檢出率89.3％；兩種及兩種

5、以上耐藥基因攜帶情況為：blaOXA-51-like+blaOXA-23-like+intI1基因84株，blaOXA-51-like+blaOXA-23-like陽性5株，blaOXA-51-like+intI1陽性8株，blaOXA-51-like+blaOXA-24-like陽性2株；4株菌僅blaOXA-51-like陽性，blaOXA-58-like、金屬酶基因(IMP-1，VIM-2)及Ⅱ類整合酶基因(intI2)均陰性；經(jīng)

6、測序及比對證實，blaOXA-23-like確定為blaOXA-23，blaOXA-24-like確定為blaOXA-72，blaOXA-51-like確定為blaOXA-66基因；87株OXA-23-like基因上游檢測到ISAbal，OXA-51-like基因上游未檢測到ISAbal。92株Ⅰ類整合酶陽性菌株中有89株(96.7％)擴增出可變區(qū)，4株未檢出可變區(qū)。共發(fā)現(xiàn)2種整合子可變區(qū)：2300bp81株，3000bp8株。經(jīng)測序比

7、對證實，2300bp可變區(qū)攜帶耐藥基因盒aacA4-catB8-aadA1，3000bp攜帶基因盒aacC1-orfX-orfX-orfX'-aadA1a；RAPD將103株鮑曼不動桿菌分成7個基因型，其中：A型共45株，為主要克??；B型23株，C型16株，D型10株，E型7株，F(xiàn)型(產(chǎn)OXA-72型碳青霉烯酶)1株，G型1株(產(chǎn)OXA-72型碳青霉烯酶)。
　　 結(jié)論：本組耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌對多種抗菌藥物耐藥現(xiàn)象嚴(yán)重，改