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文檔簡介
1、目的:本研究通過了解我院鮑曼不動桿菌感染情況、耐藥特征與流行趨勢,對臨床菌株與環(huán)境菌株進行同源性分析比較,了解院內是否存在鮑曼不動桿菌播散流行,為控制院內感染提供依據;檢測β-內酰胺酶基因與主動外排系統(tǒng)結構基因與調控基因在亞胺培南耐藥組(imipenem-resistant Acinetobacter baumannii IRAB)與敏感組(imipenem-sensitive Acinetobacter baumannii ISAB)
2、中分布差異,并對主要外排基因進行表達量分析,深入探討鮑曼不動桿菌對碳青霉烯類藥物的耐藥機制。
方法:1、本實驗收集2011年7月到10月我院臨床分離鮑曼不動桿菌共81株,同期對神經外科重癥監(jiān)護病房(ICU)進行環(huán)境污染調查采樣,在患者病床、桌面、呼吸機表面、房間門把手等部位分離到鮑曼不動桿菌28株。瓊脂稀釋法檢測上述菌株對臨床常用13種抗菌藥物的最低抑菌濃度(minimum inhibitory concentration M
3、IC)。2、采用腸桿菌科基因間重復序列 PCR(enterbacteriat repetitive intergenic consensus ERIC-PCR)與脈沖場凝膠電泳(pulsed-field gel electrophoresis PFGE)對臨床分離81株鮑曼不動桿菌和28株環(huán)境分離菌株進行基因分型,分析其主要流行型別。3、外排泵抑制試驗(PAβ N)檢測外排泵表型。聚合酶鏈反應(Polymerase Chain Reac
4、tion PCR)檢測81株臨床菌株β-內酰胺酶基因與RND家族3個主要外排系統(tǒng)AdeABC、AdeIJK及 AdeFGH結構基因與調控基因分布情況,比較其在 IRAB及ISAB中分布差異,進一步使用實時熒光定量聚合酶鏈反應(Realtime-PCR)檢測其主要外排基因表達水平。
結果:臨床分離81株鮑曼不動桿菌只對米諾環(huán)素耐藥率稍低,為30.9%;其次為亞胺培南,耐藥率為53.1%;對其它抗菌藥物耐藥率均超過60%;對頭孢西
5、丁、復方新諾明耐藥率最高,分別為97.5%、93.8%。環(huán)境分離28株鮑曼不動桿菌相比臨床分離菌株對13種抗菌藥物更為敏感,對亞胺培南和美羅培南的耐藥率僅為7.1%、3.6%;對米諾環(huán)素耐藥率為10.7%;除頭孢西丁外,對其它抗菌藥物耐藥率在20%~50%。ERIC-PCR結果顯示81株臨床分離菌株可分為6型,A型65株,為主要克隆株,B型7株,C型6株,D、E、F型各1株。28株環(huán)境分離菌也分為6型,A型13株。81株鮑曼不動桿菌 P
6、FGE基因分型分為7型,包括 A型59株,B型7株,C型4株,D型5株,E型3株,F(xiàn)型2株、G型1株。環(huán)境分離菌分為9型,A型15株,B型2株,C型1株,D型2株,E型3株,F(xiàn)型2株,G、H、I型各1株。在β-內酰胺酶檢測中,所有菌株中均攜帶OXA-51基因,未檢測到OXA-24、OXA-58、VIM-1以及VIM-2基因。β-內酰胺酶基因AmpC、OXA-23與IMP-1的檢測率分別為83.9%、71.6%及54.3%。加入外排泵抑制
7、劑 PAβN,81株鮑曼不動桿菌分離株中,43株(53%)對亞胺培南的MICs有了4~32倍的降低,可認為外排泵表型陽性。在AdeABC外排系統(tǒng)中,adeB、adeS和adeR的檢出率分別為78%、78%和74%。在AdeIJK及AdeFGH外排系統(tǒng)中,adeJ、adeL、adeF、adeG和adeH的檢出率均大于90%。經統(tǒng)計學分析,β-內酰胺酶基因AmpC、OXA-23及外排基因adeB與adeG在IRAB組和ISAB組中的分布差異
8、具有統(tǒng)計學意義。在定量PCR中,IRAB的adeB、adeJ和adeG基因的表達量平均為ISAB的3.182、2.787和7.298倍,經統(tǒng)計分析,adeB和adeG表達量在IRAB和ISAB中差異具有統(tǒng)計學意義。
結論:我院鮑曼不動桿菌只對米諾環(huán)素耐藥率稍低,其次為亞胺培南。臨床可根據藥敏結果選擇合適抗菌藥物。A型克隆株為我院鮑曼不動桿菌主要流行株,臨床菌株與環(huán)境菌株具有較高同源性,科室間存在交叉感染的可能性,需采取切實有效
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