鮑曼不動桿菌耐碳青霉烯類耐藥機制研究.pdf

1、目的：了解耐碳青霉烯類鮑曼不動桿菌流行分布情況，研究鮑曼不動桿菌耐碳青霉烯類菌株膜蛋白參與其耐藥機制形成。 方法：①收集臨床分離鮑曼不動桿菌共87株，用REP-PCR分析其流行型別，PCR擴增檢測碳青霉烯類水解酶及金屬酶基因，同時超速離心提取膜孔蛋白并進行聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析。②從同一住院病人體內(nèi)分別收集碳青霉烯類敏感和耐藥鮑曼不動桿菌各1株。MLST和REP-PCR分型，等電聚焦電泳檢測水解酶，二維電泳和

2、質(zhì)譜對差異膜蛋白進行鑒定分析，最后用PAβN外排泵抑制劑進行表型檢測，并結(jié)合Real-Time PCR檢測兩者在RNA水平的表達差異。 結(jié)果：⑴51株耐亞胺培南和美羅培南鮑曼不動桿菌中，REP-PCR分析結(jié)果以A型為主，占94.1％，而敏感菌株中差異很大；耐藥菌株中oxa-51全為陽性，45株為oxa-23陽性；36株敏感菌株中檢測到1株oxa-58陽性，29株為oxa-51陽性；金屬酶均陰性；膜蛋白分析顯示在36株耐藥株中38

3、 KD附近條帶缺失或下調(diào)，而在30株敏感株中有17株在相應(yīng)位置處表達該條帶。⑵MLST和REP-PCR結(jié)果表明耐藥株來源于敏感菌株；等電聚焦電泳在pI 7.6和9.0處檢測到β-內(nèi)酰胺酶，沒有檢測到任何已知的碳青霉烯類水解酶；耐藥株和敏感株的差異膜蛋白組學(xué)鑒定出34 KD外排泵膜蛋白和突變的OprD與CarO膜孔蛋白，外排泵抑制劑試驗表明，在PAβN存在的情況下，耐藥株的亞胺培南MIC由256 μg/ml下降到8 μg/ml，而相應(yīng)敏感