左氧氟沙星聯(lián)合亞胺培南對(duì)銅綠假單胞菌慢性肺部感染免疫低下大鼠抗菌作用及耐藥機(jī)制研究.pdf

1、目的:建立銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)慢性肺部感染合并免疫低下大鼠模型，研究免疫因素對(duì)PA治療的影響;探討左氧氟沙星(Levofloxacin，LVF)單獨(dú)應(yīng)用、同時(shí)與亞胺培南/西司他丁(Imipenem/cilastatin，IPM/CS)聯(lián)合應(yīng)用對(duì)PA慢性肺部感染的治療作用，并對(duì)相關(guān)耐藥機(jī)制進(jìn)行分析研究。
　　方法:
　　第一部分:銅綠假單胞菌慢性肺部感染合并免疫低下大鼠模型的建立<

2、br>　　應(yīng)用臨床常見(jiàn)的化療藥物環(huán)磷酰胺(Cytoxan，CTX)，以40 mg/kg給藥劑量，連續(xù)三日予以腹腔注射，通過(guò)氣管插管法將PA藻酸鹽包被體注入大鼠肺組織，建立肺部感染模型。模型建立后每7日給予大鼠相同劑量的CTX，維持大鼠免疫抑制狀態(tài)。在模型建立期間，固定時(shí)間檢測(cè)大鼠肺載菌量、肺部病理學(xué)變化等指標(biāo)，同時(shí)對(duì)外周血血常規(guī)、T細(xì)胞亞群等免疫學(xué)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。
　　第二部分:左氧氟沙星、亞胺培南單藥及聯(lián)合給藥對(duì)銅綠假單胞菌慢性肺

3、部感染免疫力低下大鼠藥效學(xué)研究
　　采用第一部分方法，建立銅綠假單胞菌慢性肺部感染免疫低下大鼠模型。將模型組大鼠隨機(jī)分為三個(gè)實(shí)驗(yàn)組，分別予以LVF45 mg/kg口服灌胃、IPM90 mg/kg腹腔注射、LVF45 mg/kg口服灌胃聯(lián)合IPM90 mg/kg腹腔注射，并設(shè)立對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)期間，對(duì)大鼠肺部病理學(xué)、免疫學(xué)等指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，收集所產(chǎn)生的耐藥菌株。
　　第三部分:銅綠假單胞菌體內(nèi)藥效學(xué)耐藥機(jī)制研究
　　采用PCR

4、等分析方法，對(duì)各組各時(shí)間點(diǎn)PA耐藥菌株，對(duì)喹諾酮類(lèi)藥物耐藥決定區(qū)(Quinolone resistance determining region，QRDR)區(qū)域突變位點(diǎn)、質(zhì)粒介導(dǎo)耐藥及OprD2孔道蛋白等指標(biāo)進(jìn)行分析。從分子機(jī)制角度對(duì)體內(nèi)分離PA耐藥株做出進(jìn)一步分析。
　　結(jié)果:
　　第一部分:銅綠假單胞菌慢性肺部感染合并免疫低下大鼠模型的建立
　　模型建立后，大鼠產(chǎn)生了不同程度的食欲下降、體重減輕、行動(dòng)力遲緩等癥狀，

5、并有弓背、脫毛、血便、鼻部與眼眶周?chē)鲅Y(jié)痂等現(xiàn)象。HE染色結(jié)果顯示，模型組大鼠在造模成功后肺部產(chǎn)生病理學(xué)病變，肺組織有較明顯的充血水腫、中性粒細(xì)胞聚集等現(xiàn)象。同時(shí)，血常規(guī)結(jié)果顯示，模型組白細(xì)胞數(shù)目有所下降(p＜0.05)，外周血中性粒細(xì)胞有不同程度的增高，T細(xì)胞亞群CD4+/CD8+等值有所升高(p＜0.05)。參照國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)，判斷模型成功建立。
　　第二部分:左氧氟沙星、亞胺培南單藥及聯(lián)合給藥對(duì)銅綠假單胞菌慢性肺部感染免疫

6、力低下大鼠藥效學(xué)研究
　　模型組大鼠給藥后，鼻周液體分泌物顯著減少、狀態(tài)有不同程度恢復(fù)，肺組織病理呈不同程度的改善。耐藥株分離率大體上隨給藥時(shí)間增長(zhǎng)而增加，并于給藥后21天達(dá)到峰值，停藥后有所降低。與LVF單藥給藥組相比，LVF聯(lián)合IPM給藥組耐藥菌株產(chǎn)生率顯著降低(p＜0.05)，同時(shí)治愈率顯著升高(p＜0.05)。
　　第三部分:銅綠假單胞菌體內(nèi)藥效學(xué)耐藥機(jī)制研究
　　LVF組耐藥菌株中給藥6天后發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒介導(dǎo)耐藥基

7、因QnrA，給藥12天后發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒介導(dǎo)耐藥基因QnrB，同時(shí)隨著給藥時(shí)間延長(zhǎng)，耐藥株質(zhì)粒介導(dǎo)耐藥基因分離頻數(shù)與頻率呈現(xiàn)不同程度的升高，停藥后分離有所下降。IPM給藥組于第6、15天檢測(cè)到MBL，聯(lián)合組耐藥株樣本未檢測(cè)出MBL陽(yáng)性;OprD2孔道蛋白缺失是本實(shí)驗(yàn)PA對(duì)IPM耐藥的主要因素，通過(guò)此部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果，聯(lián)合給藥組OprD2基因缺失數(shù)目明顯低于IPM給藥組(P＜0.05)。
　　結(jié)論:參照國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)，本實(shí)驗(yàn)成功建立了PA慢性肺部感