CD4+T細(xì)胞在銅綠假單胞菌慢性肺部感染免疫損傷中的作用機(jī)制研究.pdf

1、背景與目的:
　　 銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa，PA)是臨床上難治性肺部感染的常見病原體，往往引起肺部炎癥遷延，導(dǎo)致組織結(jié)構(gòu)損傷。CD4+T細(xì)胞是一類重要的免疫細(xì)胞，主要包括T輔助細(xì)胞(T helper cell，Th)和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Regulatory T cell，Treg)。CD4+T細(xì)胞功能失調(diào)可以引起炎癥反應(yīng)異常，但其在PA慢性肺部感染免疫損傷中的作用機(jī)制仍不明確。長期低劑量大環(huán)內(nèi)酯類

2、藥物治療可以有效緩解氣道炎癥，但其對(duì)CD4+T細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用尚未見報(bào)道。為此，本課題擬從器官水平、細(xì)胞水平和分子水平研究CD4+T細(xì)胞各亞群在PA慢性肺部感染免疫損傷過程中的作用機(jī)制，以及低劑量大環(huán)內(nèi)酯類藥物相關(guān)的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制。
　　 方法:
　　 1、通過BALB/c小鼠氣道接種含有高濃度PA的瓊脂糖珠的方法建立PA慢性肺部感染模型。比較接種高濃度PA瓊脂糖珠懸液（高濃度PA組，109 CFU/ml）、低濃度PA瓊

3、脂糖珠懸液（低濃度PA組，107 CFU/ml）和無菌瓊脂糖珠懸液（對(duì)照組）后小鼠的支氣管肺泡灌洗液白細(xì)胞計(jì)數(shù)、肺組織菌落計(jì)數(shù)、病理評(píng)分、髓過氧化物酶水平、Th1/Th2/Th17細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子水平。探討Th1/Th2/Th17在PA慢性肺部感染中的功能。
　　 2、以包裹高濃度PA的瓊脂糖珠為PA生物膜模型，比較氣道接種高濃度PA瓊脂糖珠懸液(PA生物膜組，109 CFU/ml)、高濃度游離PA菌液（游離PA組，109 C

4、FU/ml）、無菌瓊脂糖珠懸液和生理鹽水后小鼠的支氣管肺泡灌洗液白細(xì)胞計(jì)數(shù)、肺組織菌落計(jì)數(shù)、病理評(píng)分、髓過氧化物酶水平、肺組織CD4+細(xì)胞免疫熒光水平、Th1/Th2/Th17/Treg細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子水平、肺組織Foxp3+細(xì)胞免疫組化陽性率和脾臟CD4+CD25+Foxp3+細(xì)胞流式分析結(jié)果。探討PA生物膜對(duì)氣道炎癥的影響，及其對(duì)Th1/Th2/Th17/Treg細(xì)胞功能的作用。
　　 3、小鼠建模后第7d起分別給予低劑量

5、克拉霉素治療和生理鹽水治療。比較克拉霉素治療組、生理鹽水治療組和對(duì)照組小鼠的支氣管肺泡灌洗液白細(xì)胞計(jì)數(shù)、肺組織菌落計(jì)數(shù)、病理評(píng)分、髓過氧化物酶水平、肺組織CD4+細(xì)胞免疫熒光水平、Th1/Th2/Th17/Treg細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子水平。探討低劑量克拉霉素對(duì)氣道炎癥和CD4+T細(xì)胞功能的作用。
　　 結(jié)果:
　　 1、高濃度PA組小鼠的肺部改變符合PA慢性感染的表現(xiàn)。接種后第3d起，高濃度PA組小鼠的支氣管肺泡灌洗液白細(xì)

6、胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞百分比、肺組織病理損傷程度和髓過氧化物酶含量、以及Th1/Th17細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)水平均顯著高于低濃度PA組和對(duì)照組。兩組小鼠的Th2免疫反應(yīng)在接種后第5d和第7d沒有顯著差異。
　　 2、與游離PA組相比，PA生物膜組小鼠的肺部PA負(fù)荷、中性粒細(xì)胞性氣道炎癥水平和肺組織損傷程度顯著提高。接種后第5d和第7d，PA生物膜組小鼠的肺組織CD4+細(xì)胞數(shù)量以及Th1/Th17細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)水平均顯著高于

7、游離PA組。同時(shí)PA生物膜組小鼠的肺組織Foxp3+細(xì)胞數(shù)量、Treg細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)水平以及脾臟CD4+CD25+Foxp3+細(xì)胞數(shù)量均顯著低于游離PA組。
　　 3、克拉霉素治療組小鼠的中性粒細(xì)胞性氣道炎癥得到顯著緩解，但肺組織的PA負(fù)荷沒有顯著改善?？死顾刂委熃M小鼠的肺組織CD4+細(xì)胞數(shù)量、Th1/Th17細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)水平以及Foxp3表達(dá)水平較生理鹽水治療組顯著降低。
　　 結(jié)論: