基于核受體靶點(diǎn)的小分子設(shè)計(jì)及化學(xué)生物學(xué)研究.pdf

1、視黃酸X受體α(retinoid X repcetorsα，RXRα)是核受體超家族中重要的一員，RXRα受體能選擇性的與配體相結(jié)合或與其他核受體形成同源二聚體或異源二聚體，調(diào)控細(xì)胞的生理效應(yīng)，并且參與了生物體生長(zhǎng)、發(fā)育、免疫和死亡等幾乎所有的生理過(guò)程的調(diào)節(jié)，因此，它的生物學(xué)功能與疾病密切相關(guān)，例如腫瘤以及代謝綜合癥等。所以 RXRα受體一直是研究的熱點(diǎn)。目前報(bào)道的能與RXRα受體結(jié)合的天然小分子有9-cis-RA，而人工合成的有活性配

2、體也不多，因此，我們的研究目的是根據(jù) RXRα受體的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)設(shè)計(jì)一系列化合物，篩選出能與RXRα受體結(jié)合的小分子化合物。
　　本課題通過(guò)優(yōu)化RXRα-LBD蛋白提取條件，得到較高產(chǎn)量的RXRα-LBD蛋白。通過(guò)Biacore技術(shù)（Biomolecular interaction analysis）偶聯(lián)RXRα-LBD蛋白對(duì)實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有化合物進(jìn)行高通量篩選，篩選得到6個(gè)有結(jié)合活性的小分子化合物，并測(cè)得它們的解離平衡常數(shù)KD值。進(jìn)一步采

3、用等溫滴定量熱法（Isothermal titration calorimetry，ITC）測(cè)定這6個(gè)小分子化合物與RXRα-LBD蛋白的結(jié)合能力，通過(guò)實(shí)驗(yàn)方法的改進(jìn)和優(yōu)化，最后得到 WH-30和WH-15兩個(gè)小分子化合物的解離平衡常數(shù)KD值以及熱力學(xué)參數(shù)。它們的KD值與Biacore實(shí)驗(yàn)結(jié)果相近，熱力學(xué)參數(shù)表明WH-30和WH-15與RXRα-LBD蛋白的結(jié)合是自發(fā)進(jìn)行的放熱反應(yīng)。用 AutoDock4.2.5軟件對(duì)篩選出的兩個(gè)小分子

4、化合物 WH-30和WH-15與RXRα-LBD同源二聚體（PDB ID：4N5G）進(jìn)行分子對(duì)接，得到自由結(jié)合能和分子對(duì)接圖，自由結(jié)合能表示化合物與RXRα-LBD同源二聚體有結(jié)合活性，分子對(duì)接圖可以直觀看到WH-30和WH-15結(jié)合到RXRα-LBD同源二聚體的配體結(jié)合口袋，并與氨基酸形成氫鍵。因此，本課題通過(guò) Biacore、ITC技術(shù)以及分子對(duì)接實(shí)驗(yàn)得到兩個(gè)靶向結(jié)合RXRα-LBD蛋白的小分子化合物WH-30和WH-15，為治療與