中藥補(bǔ)骨脂素在自體骨髓移植中的應(yīng)用——黃世林教授治療急性粒細(xì)胞白血病的經(jīng)驗總結(jié).pdf

1、目的：導(dǎo)師黃世林教授從軍從醫(yī)60余年，他埋首岐黃，勤求故訓(xùn)，不斷地繼承發(fā)揚(yáng)，博采眾長，至今中西合璧，學(xué)養(yǎng)精深，在中醫(yī)，中西醫(yī)藥結(jié)合治療血液系統(tǒng)疾病等方面造詣頗深。他提出以“驅(qū)邪復(fù)正”為治則治療急性白血病，率先在臨床中應(yīng)用純中藥補(bǔ)骨脂(psoralea fruits)提取物補(bǔ)骨脂素(psoralen，PSO)加長波紫外線(long wave ultraviolet A，UVA)，又稱PUVA，體外凈化骨髓，采用自體骨髓移植(autolog

2、ous bone marrow transplantation，ABMT)治療急性粒細(xì)胞白血病(acute granulocytic leukemia，AGL)。本研究的目的在于全面總結(jié)臨床療效、系統(tǒng)整理老師可貴的臨床經(jīng)驗，并探討PUVA法抗白血病的部分作用機(jī)制。 方法：臨床研究分析1991年10月至2005年11月于我單位接受PUVA體外凈化ABMT的28例AGL病例的臨床資料。實驗研究選擇人類白血病HL-60、NB4和K56

3、2細(xì)胞為研究對象，Affymetrix Human U1332.0基因表達(dá)譜芯片檢測PUVA對人白血病細(xì)胞基因表達(dá)的影響；流式細(xì)胞儀(flow cytometry，F(xiàn)CM)測定PUVA后24小時細(xì)胞線粒體膜電位水平的變化、細(xì)胞Fas、FasL蛋白表達(dá)情況；熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測PUVA后4小時細(xì)胞Fas、FasL mRNA的表達(dá)；免疫細(xì)胞化學(xué)法(immunocytochemistry，ICC)檢測Caspase8、Caspase3

4、蛋白的表達(dá)情況。應(yīng)用SPSS11.5軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析。 結(jié)果： 1、28例患者凈化前后骨髓單個核細(xì)胞中位數(shù)分別為8.65×109和9.93×109個(p=0.418＞0.05)。其中25例凈化前后骨髓單個核細(xì)胞中CD34+細(xì)胞中位百分?jǐn)?shù)分別為1.96％和1.77％(p=0.543＞0.05)。 2、28例患者有27例獲得造血重建，中性粒細(xì)胞恢復(fù)至＞0.5×109/L的中位時間為+13天；血小板恢復(fù)至≥40×

5、109/L的中位時間為+16天。 3、在預(yù)處理過程中，28例患者均有不同程度的胃腸道反應(yīng)，其中11例患者出現(xiàn)嘔吐；在ABMT恢復(fù)過程中，3例患者合并感染而出現(xiàn)發(fā)熱，2例合并出血。 4、28例患者中有8例在ABMT后中位時間7個月復(fù)發(fā)，總復(fù)發(fā)率為28.57％，1年復(fù)發(fā)概率為22.22％，2、3、5，7、10年復(fù)發(fā)概率均為29.63％。 5、隨訪中位時間52.5月，28例患者平均生存期為143.75±15.63月，9

6、5％可信區(qū)間為(113.11，174.39)；實際1年生存率為82.14％，2年生存率為75％，3、5、7、10年生存率均為71.43％；1年生存概率為81.74％，2年生存概率為73.22％，3、5、7、10年生存概率均為71.43％。 6、基因芯片結(jié)果示，PUVA抗白血病的作用主要涉及與細(xì)胞凋亡有關(guān)的蛋白代謝、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的折疊與修飾以及細(xì)胞表面受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，細(xì)胞體現(xiàn)出凋亡及其相關(guān)功能基因的激活． 7、FCM

7、結(jié)果示PUVA作用后24小時HL-60、NB4和K562細(xì)胞線粒體膜電位水平、FasL蛋白表達(dá)明顯下降，F(xiàn)as蛋白表達(dá)明顯升高。 8、熒光定量PCR檢測結(jié)果示PUVA作用后4小時Fas mRNA表達(dá)升高，F(xiàn)asLmRNA表達(dá)下降。 9、ICC檢測結(jié)果示PUVA可促進(jìn)細(xì)胞Caspase8、Caspase3蛋白表達(dá)。 結(jié)論： 1、依據(jù)PSO的光敏特性及PUVA的抗白血病活性，在國內(nèi)外率先將PSO應(yīng)用于ABMT