吉蘭-巴雷綜合征患者免疫球蛋白治療前后血清的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：吉蘭-巴雷綜合征（GBS）是以周圍神經(jīng)廣泛的炎癥性節(jié)段性脫髓鞘，部分伴有軸索變性為主要病理特點(diǎn)的自身免疫性疾病。腦脊液蛋白.細(xì)胞分離是本癥特點(diǎn)之一。本病在世界范圍內(nèi)年發(fā)病率約為0.6～4/10萬，是目前急性軟癱的最常見病因。華北是世界上GBS病例最多的地區(qū)之一，從1973年起，河北醫(yī)大二院收入院治療GBS患者超過2200例。該病可致患者病殘，甚至導(dǎo)致患者死亡，即使在醫(yī)療水平相對好的醫(yī)院救治，其致死率仍在3-7％，大約7-15％的患

2、者雖渡過急性期，卻遺留永久性的神經(jīng)功能障礙，影響了患者的生活質(zhì)量，并給社會、家庭帶來沉重的經(jīng)濟(jì)和精神負(fù)擔(dān)，國內(nèi)外對此病均高度關(guān)注。本病的病因及發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，一般認(rèn)為屬自身免疫疾病。病人血液中存在與發(fā)病有關(guān)的抗體、補(bǔ)體及細(xì)胞因子等，近來以大劑量免疫球蛋白治療本病，臨床證明有效。如能清楚地知道與GBS發(fā)病相關(guān)的抗體、補(bǔ)體及細(xì)胞因子究竟是何種蛋白質(zhì)或多肽以及經(jīng)大劑量免疫球蛋白治療后，GBS患者血清中疾病相關(guān)蛋白質(zhì)的含量發(fā)生了怎樣的變化

3、，則對明確GBS發(fā)病機(jī)理乃至攻克此疾病且從分子水平理解免疫球蛋白作用機(jī)制有重要的意義。
　　 新近出現(xiàn)的蛋白質(zhì)組學(xué)（Proteomics）技術(shù)是從整體的角度分析細(xì)胞、組織、體液等動態(tài)變化的蛋白質(zhì)組成成分，表達(dá)水平和修飾狀態(tài)，了解蛋白質(zhì)之間的相互作用與聯(lián)系，揭示蛋白質(zhì)功能與細(xì)胞生命活動規(guī)律的研究方法。它可以比較疾病與正常以及不同病理生理狀態(tài)樣品之間蛋白質(zhì)整體表達(dá)水平，是揭示疾病分子機(jī)制，發(fā)現(xiàn)疾病標(biāo)志蛋白，尋找新的藥物靶標(biāo)的理想工具

4、，也是生命科學(xué)進(jìn)入后基因組時(shí)代的重要標(biāo)志。
　　 本研究擬對經(jīng)大劑量免疫球蛋白治療前后的GBS患者血清進(jìn)行比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究，旨在深入理解GBS發(fā)病分子機(jī)制及大劑量免疫球蛋白作用分子機(jī)制，為進(jìn)一步尋找早期診斷及治療GBS的有效方法提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：
　　 1、研究對象：16例在河北醫(yī)科大學(xué)二院住院的經(jīng)免疫球蛋白治療的GBS患者（依據(jù)Asbury診斷標(biāo)準(zhǔn)）。
　　 2、研究步驟：分別留取研究對象治

5、療前以及免疫球蛋白治療5天后的血液樣本，分離血清，提取血清蛋白，第一向等電聚焦電泳、第二向垂直SDS-PAGE電泳后、以硝酸銀或考馬斯亮蘭R250顯色。透射掃描雙向電泳凝膠，所得圖譜以Image Master 2D Elite軟件進(jìn)行圖像分析。將感興趣蛋白質(zhì)點(diǎn)從考馬斯亮蘭染色的凝膠上切下，膠內(nèi)蛋白質(zhì)酶解。以MALDI-TOF質(zhì)譜或MALDI-TOF/TOF串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)結(jié)合數(shù)據(jù)庫檢索對蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定。
　　 結(jié)果：以蛋白質(zhì)組技術(shù)對

6、經(jīng)大劑量免疫球蛋白治療5天后的GBS患者血清與免疫球蛋白治療前血清相比較，30個(gè)蛋白的表達(dá)量發(fā)生明顯變化，包括補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4、α2巨球蛋白、Peroxiredoxin-2、銅藍(lán)蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、甲狀腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、載脂蛋白E、維生素D結(jié)合蛋白、血漿淀粉樣蛋白P、載脂蛋白J、觸珠蛋白、α1-抗胰蛋白酶、β2-糖蛋白1、α1-抗胰凝乳蛋白酶、載脂蛋白A-I、補(bǔ)體H因子、補(bǔ)體B因子、Afamin、載脂蛋白A-Ⅳ、血紅素結(jié)合蛋白、Ficolin