Lipocalin-2基因的表達產物對人胚腎細胞生長的影響.pdf

1、目的:構建載有Lipocalin-2基因真核表達質粒pEGFP-C1和原核表達質粒pET32a(+)，觀察其表達蛋白對人胚腎細胞生長的影響。 方法 利用 RT-PCR 從鼠巨噬細胞 RAW264.7中擴增目的基因Lcn-2，分別克隆入真核表達質粒 pEGFP-Cl 和原核表達質粒pET32a(+)中。用質粒pET32a(+)轉化大腸桿菌E.coli.，制備重組Lcn-2。將真核表達質粒 pEGFP-C1 用脂質體轉染法穩(wěn)

2、定轉染人胚腎細胞，通過熒光觀察，RT-PCR鑒定該基因的表達。從外源加入重組Lcn-2蛋白和真核轉染胞內表達 Lcn-2 兩種途徑作用于人胚腎細胞，通過細胞增殖試驗MTT法和免疫印跡法檢測細胞增殖核抗原 PCNA 的表達，來反映Lcn-2基因的表達產物對人胚腎細胞生長的影響。 結果： 經酶切和測序鑒定，Lcn-2真核表達質粒構建成功；在重組Lcn-2最佳作用終濃度為0.5×10-6 mol/L條件下，細胞培養(yǎng)72h時做M

3、TT。法細胞增殖試驗，重組Lcn-2 處理組 OD 值為1.891±0.165，未處理組OD值為1.522±0.0467，二者差異顯著(P＜0.0 1)，而重組質粒 PL-2組和空質粒pEGFP-C1組的OD值差異不顯著(P＞0.05)；同樣的條件，將細胞同時培養(yǎng)72h做免疫印跡實驗，重組Lcn-2處理組凈 OD 值為0.684±0.009，未處理組凈 OD 值為0.563±0.001，二者差異顯著(P＜0.05)，而重組質粒PL-2組