人抗HBsAg單鏈抗體基因的構(gòu)建、表達(dá)及其表達(dá)產(chǎn)物的活性鑒定.pdf

1、目的 構(gòu)建人抗HBsAg單鏈抗體基因,在真核細(xì)胞和原核細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá),并對(duì)其表達(dá)產(chǎn)物的活性進(jìn)行鑒定.方法 以從噬菌體抗體庫(kù)中篩選獲得的抗HBsAg的Fab抗體基因?yàn)槟０?分別擴(kuò)增出其輕、重鏈可變區(qū)(V<,L>、V<,H>)基因,通過(guò)重組PCR方法將輕、重鏈可變區(qū)基因用連接肽(Gly<,4>Ser)<,3>的編碼序列連接,并引入前導(dǎo)肽編碼序列,構(gòu)建具有L-V<,H>-Linker-V<,L>結(jié)構(gòu)的單鏈抗體基因.將所構(gòu)建的單鏈抗體基因克隆入

2、綠色熒光蛋白融合表達(dá)載體pEGFP-N3,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞,分析其表達(dá)情況,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Jurkat細(xì)胞,建立穩(wěn)定表達(dá)ScFv融合蛋白的細(xì)胞系,并分析其表達(dá)產(chǎn)物的活性.將獲得的不含前導(dǎo)肽的單鏈抗體基因克隆入HA和6His融合的原核表達(dá)載體pTAT-HA,在大腸桿菌BL21中進(jìn)行表達(dá),分析其表達(dá)情況.表達(dá)產(chǎn)物并經(jīng)Ni-NTA柱純化后,分析其活性.結(jié)論 (1)成功地構(gòu)建了五種人抗HBsAg單鏈抗體基因.(2)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染COS7細(xì)胞,獲得了分