抗人CD28單鏈抗體基因的構(gòu)建、表達(dá)純化及功能測(cè)定.pdf_第1頁(yè)
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1、鼠源性單抗在人體使用后可產(chǎn)生人抗鼠抗體(HumanAnti-MouseAntibody,HAMA)反應(yīng)，而且分子量大，不能有效進(jìn)入病灶部位，臨床使用受到限制。單鏈抗體(singlechainantibody，ScFV)是由一條連接肽將IgG分子的重鏈和輕鏈的可變區(qū)連接而成的，減少了免疫原性，分子小，實(shí)體組織穿透力強(qiáng)，血漿半衰期短，因而在臨床疾病的診斷和治療中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。 應(yīng)用TP-PCR方法構(gòu)建抗人CD28單鏈抗體基因

2、(抗CD28-ScFv)和pET32a-CD28ScFv重組表達(dá)載體。SDS-PAGE和Westem-blot分析結(jié)果表明，抗CD28-ScFv在BL21(DE3)中獲得高效表達(dá)，表達(dá)量占菌體總蛋白30％以上，表達(dá)產(chǎn)物以不溶性包涵體的形式存在。經(jīng)過溶解包涵體，體外復(fù)性過程和鎳柱親和層析，純化抗CD28-ScFv。應(yīng)用流式細(xì)胞儀和MTT方法分別鑒定純化的抗CD28-ScFv的免疫學(xué)活性及生物學(xué)功能。 本研究改進(jìn)了傳統(tǒng)的蛋白復(fù)性條

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