睪丸孤核受體4(TR4)對(duì)去勢(shì)抵抗性前列腺癌多西他賽化療敏感性影響的研究.pdf

1、研究背景:
　　去勢(shì)抵抗型前列腺癌（Castration resistant prostate cancer，CRPC）是目前臨床治療的難點(diǎn)和基礎(chǔ)研究的熱點(diǎn)，多西他賽是目前臨床上CRPC化療的一線(xiàn)藥物1,2,3。其作用機(jī)制是:多西他賽進(jìn)入細(xì)胞后能優(yōu)先結(jié)合β-微管蛋白，導(dǎo)致微管在缺少GTP和其他一些輔助蛋白因子時(shí)發(fā)生聚合，這種靜態(tài)的聚合破壞了細(xì)胞正常的有絲分裂過(guò)程，并使細(xì)胞分裂停滯于G2/M期，最終將導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。此外，多西他賽還能

2、誘導(dǎo)Bcl-2蛋白的磷酸化，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡。但令人遺憾的是臨床上使用多西他賽化療，腫瘤緩解率僅為12.1％4，中位生存期僅延長(zhǎng)2.5個(gè)月。且由于遺傳性或獲得性耐藥的產(chǎn)生，化療敏感性逐漸降低5。這種耐藥性的產(chǎn)生的機(jī)制還不明確，因而也成為研究的熱點(diǎn)。
　　睪丸孤核受體4(Testicular receptor4，TR4)是類(lèi)固醇家族中的一員，TR4是NR2C2基因編碼的一種轉(zhuǎn)錄因子，又名TAK16。TR4廣泛分布于體內(nèi)各器官。目

3、前發(fā)現(xiàn)的TR4靶基因有很多，如脂質(zhì)蛋白A，CD36，磷酸烯醇式丙酮酸激酶等。大量的研究表明TR4與脂質(zhì)代謝、糖代謝，中樞神經(jīng)發(fā)育、小腦發(fā)育、紅細(xì)胞代謝等重要生理功能密切相關(guān)。前期研究還發(fā)現(xiàn)，TR4陰性細(xì)胞（TR4-/-，來(lái)源于TR4基因敲除小鼠）與正常細(xì)胞（來(lái)源于野生型小鼠）相比，氧化應(yīng)激、基因修復(fù)等功能受損7-11，而氧化應(yīng)激、基因修復(fù)等功能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。在我們的預(yù)實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)過(guò)多西他賽處理的前列腺癌細(xì)胞PC3細(xì)胞TR4表達(dá)水平

4、升高，提示了TR4與多西他賽化療可能存在關(guān)聯(lián)，但國(guó)內(nèi)外較少有TR4與前列腺癌多西他賽相關(guān)方面的研究報(bào)道。
　　研究目的:
　　本項(xiàng)研究主要的目的是通過(guò)細(xì)胞及臨床組織兩個(gè)層面明確TR4與前列腺癌多西他賽化療敏感性之間的關(guān)系，并探討其可能的機(jī)制。
　　研究方法:
　　1.運(yùn)用慢病毒感染技術(shù)建立不同TR4表達(dá)水平的前列腺癌細(xì)胞系。采用MTT法檢測(cè)不同TR4表達(dá)水平的PC3細(xì)胞藥物半數(shù)致死量(half maximal i

5、nhibitoryconcentration，IC50)
　　2.采用MTT法檢測(cè)不同TR4表達(dá)水平的PC3細(xì)胞在多西他賽的作用下，不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞的存活情況。
　　3.采用凋亡檢測(cè)法檢測(cè)在多西他賽作用下，TR4表達(dá)水平對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。
　　4.運(yùn)用免疫組化（Immunohistochemistry，IHC）技術(shù)檢測(cè)接受多西他賽化療后不同預(yù)后前列腺癌穿刺標(biāo)本TR4表達(dá)水平，觀察TR4表達(dá)水平與前列腺癌化療效果之間的聯(lián)系

6、，在臨床層面驗(yàn)證細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。
　　研究結(jié)果:
　　1.運(yùn)用慢病毒感染技術(shù)，我們建立了TR4基因敲除前列腺癌細(xì)胞系(PC3scr/siTR4)和TR4基因過(guò)表達(dá)細(xì)胞系(PC3 vector/TR4)。MTT實(shí)驗(yàn)表明，在TR4敲除細(xì)胞系，PC3 siTR4相對(duì)PC3 scr細(xì)胞多西他賽的IC50下降，TR4過(guò)表達(dá)細(xì)胞PC3 TR4相對(duì)PC3 vector細(xì)胞多西他賽IC50升高。
　　2.生長(zhǎng)曲線(xiàn)實(shí)驗(yàn)表明，在多西他賽持

7、續(xù)作用下，PC3 siTR4存活情況不及PC3scr。與此相對(duì)應(yīng)的是，在多西他賽持續(xù)作用下， PC3 TR4存活情況優(yōu)于PC3 vector。
　　3.凋亡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在多西他賽作用下，TR4敲除細(xì)胞凋亡率升高，TR4過(guò)表達(dá)細(xì)胞凋亡率降低。
　　4.免疫組化結(jié)果表明，TR4表達(dá)水平高低與多西他賽化療效果負(fù)相關(guān)，在化療效果差（PSA下降＜50％）的病人中，TR4表達(dá)水平相對(duì)較高;在化療效果好(PSA下降＞50％)的病人中，TR4