睪丸孤核受體4(TR4)在前列腺癌放射治療中作用的研究.pdf

1、研究背景和目的:
　　前列腺癌是中老年男性泌尿生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤之一。放射治療是前列腺癌最重要的治療方法之一。對于臨床早期的局限性前列腺癌患者，放射治療是除根治性前列腺切除術(shù)以外，另一種可達(dá)到根治性效果的治療手段。但是仍有相當(dāng)一部分前列腺癌患者在接受根治性放射治療后會(huì)出現(xiàn)生化復(fù)發(fā)，甚至是臨床復(fù)發(fā)，從而導(dǎo)致治療失敗。因此，尋找預(yù)測前列腺癌放射治療療效的指標(biāo)，或是前列腺癌放射增敏治療的靶點(diǎn)，具有重要的臨床意義。
　　放射線

2、對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用的本質(zhì)可以解釋為腫瘤細(xì)胞不能修復(fù)其所引起的DNA損傷;而腫瘤細(xì)胞對IR的內(nèi)在敏感性取決于其修復(fù)DNA損傷的能力。在DNA損傷修復(fù)機(jī)制相關(guān)通路中尋找可能的療效預(yù)判標(biāo)志物，或通過抑制DNA損傷修復(fù)成分來增強(qiáng)腫瘤的放射敏感性，是目前研究的方向。
　　睪丸孤核受體4（Testicular Orphan Nuclear Receptor4，TR4）是孤兒受體(OrphanReceptor)家族的一員。前期研究已發(fā)現(xiàn):TR

3、4在細(xì)胞對抗氧化應(yīng)激損傷中起重要的作用。TR4可以通過調(diào)控Cockayne綜合征B基因(Cockayne Syndrome B，CSB)的表達(dá)，來調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄偶聯(lián)的核酸切除修復(fù)機(jī)制(the nucleotide excision repair pathway,NER)，從而促進(jìn)紫外線照射后所導(dǎo)致的DNA損傷的修復(fù)。由此可以推測，TR4可能影響到腫瘤的放射治療療效。
　　然而，目前對于TR4在前列腺癌放射治療方面所起的作用及相關(guān)機(jī)制的研

4、究尚無開展。在本研究中，我們對此進(jìn)行了探索，并提出了TR4作為前列腺癌放射治療預(yù)后判斷或放療增敏靶點(diǎn)的潛在意義和臨床價(jià)值。
　　研究方法和結(jié)果:
　　1.TR4蛋白在人類前列腺癌組織中的表達(dá)及其與放射治療療效相關(guān)性的研究
　　我們以在浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬邵逸夫醫(yī)院接受放射治療（主要是近距離照射治療）的前列腺癌患者為研究對象，回顧性分析其臨床隨訪資料，根據(jù)其隨訪結(jié)果劃分為生化復(fù)發(fā)組和對照組。采用免疫組織化學(xué)染色方法檢測TR

5、4蛋白在兩組患者放射治療前的前列腺癌穿刺組織標(biāo)本中的表達(dá)情況。
　　研究發(fā)現(xiàn)TR4蛋白的表達(dá)水平和前列腺癌患者放射治療的療效之間存在著負(fù)相關(guān)性:出現(xiàn)生化復(fù)發(fā)者，其前列腺癌組織中TR4蛋白表達(dá)水平較高;未出現(xiàn)生化復(fù)發(fā)者，其前列腺癌組織中TR4蛋白表達(dá)水平較低。生化復(fù)發(fā)組中TR4蛋白免疫組化染色陽性結(jié)果比例為69.23％(9/13);對照組中TR4蛋白免疫組化染色陽性結(jié)果比例為15.38％(2/13); Fisher精確概率檢驗(yàn)證實(shí)兩

6、組間TR4染色陽性結(jié)果比例有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.02)。提示前列腺癌組織中的TR4蛋白的表達(dá)水平可以預(yù)測患者放射治療的預(yù)后情況。
　　2.靶向調(diào)節(jié)TR4基因表達(dá)改變前列腺癌細(xì)胞放射敏感性的研究
　　我們選擇兩種不同的前列腺癌細(xì)胞系（PC-3和LNCaP），采用成熟的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)和RNA干擾技術(shù)來靶向調(diào)節(jié)這兩種前列腺癌細(xì)胞中的TR4基因表達(dá)水平，構(gòu)建了兩種具有不同TR4基因表達(dá)水平的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞克隆:TR4 Overexpre

7、ssed的PC-3 TR4/PC-3 vector和TR Knocking-down的LNCaP shTR4/LNCaP shNC。采用多種經(jīng)典的放射生物學(xué)檢測方法（包括MTT檢測、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)等），來評估具有不同TR4基因表達(dá)水平的前列腺癌細(xì)胞的放射敏感性;并通過研究DNA損傷修復(fù)動(dòng)力學(xué)初步探索了TR4基因影響前列腺癌細(xì)胞放射敏感性的可能機(jī)制。
　　研究發(fā)現(xiàn)前列腺癌細(xì)胞中的TR4基因表達(dá)水平差異可以影響其放射敏感性:TR4基

8、因表達(dá)水平調(diào)高可以降低放射線造成的短期殺傷效應(yīng)，TR4基因表達(dá)水平敲低可以增強(qiáng)放射線造成的短期殺傷效應(yīng)。TR4基因表達(dá)水平調(diào)高可以增強(qiáng)前列腺癌細(xì)胞的克隆形成能力，TR4 Overexpressed對PC-3的放射增敏比(SER)為0.910;TR4基因表達(dá)水平敲低可以減弱前列腺癌細(xì)胞的克隆形成能力，TR4 Knocking-down對LNCaP的放射增敏比(SER)為1.243。總之，TR4基因表達(dá)水平敲低可以增強(qiáng)其放射敏感性，TR4基

9、因表達(dá)水平調(diào)高可以增強(qiáng)其放射抵抗性。靶向調(diào)控TR4基因表達(dá)可為前列腺癌的放療增敏提供潛在的新靶點(diǎn)。并發(fā)現(xiàn)TR4Knocking-down后，LNCaP的DSBs的再連接動(dòng)力學(xué)明顯受損，初步探明TR4基因影響前列腺癌細(xì)胞放射敏感性這一現(xiàn)象可能與TR4調(diào)控參與DNA雙鏈損傷(DSBs)修復(fù)途徑有關(guān)。
　　研究結(jié)論:
　　本研究構(gòu)建了具有穩(wěn)定表達(dá)不同TR4基因水平的前列腺癌細(xì)胞克隆。證實(shí)TR4基因表達(dá)水平的高低可以影響前列腺癌細(xì)胞